[发明专利]发酵法制备枸杞活性肽及方法和应用与抑制剂、功能食品

说明书

本发明涉及一种发酵法制备枸杞活性肽的方法，本发明利用微生物发酵枸杞蛋白质制备枸杞活性肽，经本发明技术制备的枸杞活性肽具有以下特点：经过微生物的蛋白质酶体系作用，枸杞蛋白中的大分子量蛋白质被降解为小分子肽，不仅避免了枸杞蛋白引起过敏等不良反应，又使肽的活性位点暴露而表现出血管紧张素转换酶(angiotensin‑converting enzyme,ACE)和二肽基肽酶(dipeptidyl peptidase IV,DPP‑IV)抑制活性，枸杞活性肽可用于药品、功能性食品、食品添加剂等领域，具有广阔应用前景。

技术领域

本发明涉及一种发酵法制备枸杞活性肽的方法，本发明利用微生物发酵枸杞蛋白质制备枸杞活性肽。

背景技术

生物活性肽是一类由2～20一个氨基酸组成的、相对分子质量小于6kDa的对生物机体的生命活动有益或是具有生理作用的肤类化合物的总称，具有非常重要的科学意义。

天然产物仍然是生物活性肽的主要来源，因为植物、动物和乳制品都含有大量的蛋白质。有些肽在亲本蛋白中不活跃，可以通过酶解或微生物发酵释放。枯草芽孢杆菌因其强大的蛋白水解活性而被广泛应用于微生物发酵。与未发酵蛋白相比，发酵产物具有更好的溶解性和稳定性。

枸杞是茄科植物，枸杞果实枸杞子是我国传统的药食同源药材，《中药大辞典》记载枸杞子具有滋补肝肾、益精明目的功效，枸杞子含有枸杞多糖、黄酮、多酚、类胡萝卜素等多种活性物质，具有抗氧化、降血脂、抗衰老、保肝等生物活性。干枸杞中枸杞蛋白质含量为14.67％，含有18种氨基酸,其中8种为人体必需氨基酸，是良好的生物活性肽来源。

血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)作为一种多功能酶，广泛存在于人体中，通过作用于体内的肾素-血管紧张素系统和激肽释放酶-激肽系统起到调节血压的功能。因此ACE抑制剂作为一种降血压药物被广泛利用。二肽基肽酶(dipeptidyl peptidase IV,DPP-IV)是一种细胞表面的丝氨酸蛋白酶，可以灭活多种生物活性肽，包括胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)。DPP-IV抑制剂通过使DPP-IV失活，提高体内GLP-1水平，产生调节血糖的作用。但是由于西药类合成药物会造成肝肾负担，伴随极大地副作用，所以具有生物功能的活性肽在治疗和/或预防高血压、高血糖的药物及保健食品具有良好的发展前景。

发明内容

本发明涉及一种发酵法制备枸杞活性肽的方法，本发明利用微生物发酵枸杞蛋白质制备枸杞活性肽，活性肽表现出血管紧张素转换酶和二肽基肽酶抑制活性。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

提取枸杞蛋白，经过微生物发酵枸杞蛋白制备枸杞活性肽。

(1)枸杞蛋白提取物的制备

以干枸杞为原料，称取枸杞并加入其8～20倍(枸杞g/mL水)去离子水浸泡2～8小时后粉碎，超声提取20～60min，于3000～8000rpm离心10～20min，沉淀用于提取枸杞蛋白；

沉淀冷冻干燥后再次粉碎得到枸杞粉；枸杞粉中加入其5～20倍(枸杞粉g/mL提取液)体积的有机溶剂提取液，于温度20～80℃、转速80～200rpm搅拌提取0.5～2小时，去除液体，保留固体，重复提取过程2～4次，滤饼冷冻干燥后为枸杞蛋白；

(2)枸杞活性肽的制备

将枸杞蛋白加入其5～20倍(枸杞蛋白g/mL水)去离子水，用1～5M的氢氧化钠溶液调节pH至7.2～7.5，接种微生物菌种，发酵液菌含量为1*10⁶～2*10⁸CFU/mL，于35～50℃发酵24～72小时；发酵结束后在9000～15000rpm离心5～20min，取上清液冷冻干燥，得到发酵粗提取物；