[发明专利]人喉白斑上皮细胞三维培养模型的建立方法及其应用有效
| 申请号： | 201910808332.5 | 申请日： | 2019-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN110484488B | 公开（公告）日： | 2022-04-01 |
| 发明（设计）人： | 周水洪;敖胤杰;鲍洋洋;钟江涛;陈哲;沈丽芳;喻而;余祺 | 申请（专利权）人： | 浙江大学医学院附属第一医院 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 杨采良 |
| 地址： | 310006 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 白斑 上皮细胞 三维 培养 模型 建立 方法 及其 应用 | ||
1.人喉白斑上皮细胞三维培养模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：白斑细胞原代培养，取组织块，分离上皮细胞，去除成纤维细胞；用酶消化法分离上皮细胞；消化液为胰酶和EDTA的混合物，具体配制方法为，配制质量浓度为0.25％的胰酶和0.02％的EDTA，并按照体积比1：1配制无菌混合消化液；
步骤2：不定期检测细胞增殖；
步骤3：取培养至第三代或第四代的白斑细胞，消化细胞，计数后留取1×108个细胞制成细胞悬液；
步骤4：冰上操作，Matrigel基质胶中加入DMEM培养基制成稀释液，按照1ml Matrigel基质胶中加入1ml DMEM培养基的比例制成稀释液；
步骤5：冰上操作，按照稀释液：细胞悬液为2：1的比例混合，得到新的细胞悬液，将新的细胞悬液按照每孔0.6ml加入至24孔板中；
步骤6：将24孔板转移至37℃细胞培养箱中培养12h后，各孔加入DMEM1ml后继续培养1天即可。
2.根据权利要求1所述的人喉白斑上皮细胞三维培养模型的建立方法，其特征在于：步骤1中，喉白斑组织块用无菌D-Hank’S液反复冲洗。
3.根据权利要求2所述的人喉白斑上皮细胞三维培养模型的建立方法，其特征在于：步骤1中，组织块用D-Hank’S液反复冲洗后，用2.4mg/ml DispaseII浸没组织块。
4.根据权利要求1所述的人喉白斑上皮细胞三维培养模型的建立方法，其特征在于：步骤2中，用CCK-8检测细胞增殖。
5.如权利要求1-4任一所述的人喉白斑上皮细胞三维培养模型的建立方法在白斑细胞培养中的应用。
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