[发明专利]一种表达三肽酶的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法在审
申请号: | 201910808493.4 | 申请日: | 2019-08-29 |
公开(公告)号: | CN110408583A | 公开(公告)日: | 2019-11-05 |
发明(设计)人: | 诸葛斌;吴文煜;宗红;陆信曜 | 申请(专利权)人: | 江南大学 |
主分类号: | C12N1/21 | 分类号: | C12N1/21;C12N15/57;C12N15/75;A23L5/20;C12R1/125 |
代理公司: | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人: | 张勇 |
地址: | 214000 江苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 三肽酶 重组枯草芽孢杆菌 构建 枯草芽孢杆菌 基因工程领域 重组表达载体 高效表达 重组菌株 氨肽酶 发酵液 酶活 三肽 摇瓶 生物工程 克隆 基因 转化 优化 | ||
1.一种重组枯草芽孢杆菌,其特征在于,表达氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的三肽酶。
2.如权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌,其特征在于,携带如SEQ ID NO.2所示的编码所述三肽酶的基因。
3.如权利要求1或2所述的重组枯草芽孢杆菌,其特征在于,其宿主包括枯草芽孢杆菌WB600;其表达载体包括pMA5。
4.构建权利要求1-3任一所述的重组枯草芽孢杆菌的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)合成编码SEQ ID NO.1所示三肽酶的基因;
(2)将步骤(1)合成的基因连接到表达载体上,获得重组质粒;
(3)将步骤(2)构建的重组质粒转化至枯草芽孢杆菌中表达。
5.如权利要求4所述的构建方法,其特征在于,所述转化包括化学转化法。
6.权利要求1-3任一所述的重组枯草芽孢杆菌在三肽酶生产中的应用。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于,所述应用包括以下步骤:
(1)挑取活化的重组枯草芽孢杆菌单菌落接种于LB培养基中培养;
(2)吸取步骤(1)中得到的培养液,加入到发酵培养基中发酵,进行表达;
(3)将步骤(2)中获得的发酵液离心收集上清,即为三肽酶胞外粗酶液。
8.如权利要求7所述的应用,其特征在于,步骤(2)中所述的发酵是在35-39℃、200-220rpm条件下培养16-24h。
9.如权利要求7或8所述的应用,其特征在于,步骤(2)具体包括:取步骤(1)中得到的培养液,加入至发酵培养基中,培养液添加量为1%-3%,在35-39℃、200-220rpm条件下发酵22-24h。
10.权利要求1-3任一所述的重组枯草芽孢杆菌在食品领域中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江南大学,未经江南大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910808493.4/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。