[发明专利]一种表达三肽酶的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法在审
| 申请号： | 201910808493.4 | 申请日： | 2019-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN110408583A | 公开（公告）日： | 2019-11-05 |
| 发明（设计）人： | 诸葛斌;吴文煜;宗红;陆信曜 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/57;C12N15/75;A23L5/20;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 三肽酶 重组枯草芽孢杆菌 构建 枯草芽孢杆菌 基因工程领域 重组表达载体 高效表达 重组菌株 氨肽酶 发酵液 酶活 三肽 摇瓶 生物工程 克隆 基因 转化 优化 | ||
1.一种重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，表达氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的三肽酶。
2.如权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，携带如SEQ ID NO.2所示的编码所述三肽酶的基因。
3.如权利要求1或2所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，其宿主包括枯草芽孢杆菌WB600；其表达载体包括pMA5。
4.构建权利要求1-3任一所述的重组枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)合成编码SEQ ID NO.1所示三肽酶的基因；
(2)将步骤(1)合成的基因连接到表达载体上，获得重组质粒；
(3)将步骤(2)构建的重组质粒转化至枯草芽孢杆菌中表达。
5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述转化包括化学转化法。
6.权利要求1-3任一所述的重组枯草芽孢杆菌在三肽酶生产中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：
(1)挑取活化的重组枯草芽孢杆菌单菌落接种于LB培养基中培养；
(2)吸取步骤(1)中得到的培养液，加入到发酵培养基中发酵，进行表达；
(3)将步骤(2)中获得的发酵液离心收集上清，即为三肽酶胞外粗酶液。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤(2)中所述的发酵是在35-39℃、200-220rpm条件下培养16-24h。
9.如权利要求7或8所述的应用，其特征在于，步骤(2)具体包括：取步骤(1)中得到的培养液，加入至发酵培养基中，培养液添加量为1％-3％，在35-39℃、200-220rpm条件下发酵22-24h。
10.权利要求1-3任一所述的重组枯草芽孢杆菌在食品领域中的应用。
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