[发明专利]一种表达三肽酶的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法在审

专利信息
申请号: 201910808493.4 申请日: 2019-08-29
公开(公告)号: CN110408583A 公开(公告)日: 2019-11-05
发明(设计)人: 诸葛斌;吴文煜;宗红;陆信曜 申请(专利权)人: 江南大学
主分类号: C12N1/21 分类号: C12N1/21;C12N15/57;C12N15/75;A23L5/20;C12R1/125
代理公司: 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 代理人: 张勇
地址: 214000 江苏*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 三肽酶 重组枯草芽孢杆菌 构建 枯草芽孢杆菌 基因工程领域 重组表达载体 高效表达 重组菌株 氨肽酶 发酵液 酶活 三肽 摇瓶 生物工程 克隆 基因 转化 优化
【权利要求书】:

1.一种重组枯草芽孢杆菌,其特征在于,表达氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的三肽酶。

2.如权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌,其特征在于,携带如SEQ ID NO.2所示的编码所述三肽酶的基因。

3.如权利要求1或2所述的重组枯草芽孢杆菌,其特征在于,其宿主包括枯草芽孢杆菌WB600;其表达载体包括pMA5。

4.构建权利要求1-3任一所述的重组枯草芽孢杆菌的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)合成编码SEQ ID NO.1所示三肽酶的基因;

(2)将步骤(1)合成的基因连接到表达载体上,获得重组质粒;

(3)将步骤(2)构建的重组质粒转化至枯草芽孢杆菌中表达。

5.如权利要求4所述的构建方法,其特征在于,所述转化包括化学转化法。

6.权利要求1-3任一所述的重组枯草芽孢杆菌在三肽酶生产中的应用。

7.如权利要求6所述的应用,其特征在于,所述应用包括以下步骤:

(1)挑取活化的重组枯草芽孢杆菌单菌落接种于LB培养基中培养;

(2)吸取步骤(1)中得到的培养液,加入到发酵培养基中发酵,进行表达;

(3)将步骤(2)中获得的发酵液离心收集上清,即为三肽酶胞外粗酶液。

8.如权利要求7所述的应用,其特征在于,步骤(2)中所述的发酵是在35-39℃、200-220rpm条件下培养16-24h。

9.如权利要求7或8所述的应用,其特征在于,步骤(2)具体包括:取步骤(1)中得到的培养液,加入至发酵培养基中,培养液添加量为1%-3%,在35-39℃、200-220rpm条件下发酵22-24h。

10.权利要求1-3任一所述的重组枯草芽孢杆菌在食品领域中的应用。

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