[发明专利]一种神经球免疫荧光染色的方法

权利要求书

1.一种神经球免疫荧光染色的方法，其特征在于，步骤如下：

（1）神经球清洗：取悬浮培养的直径为170～200 μm的神经球，离心，弃上清，加入PBS缓冲液重悬神经球，再次离心，弃上清；

（2）固定：加入固定剂4%多聚甲醛溶液，轻柔混匀，室温静置30分钟，每5分钟轻弹管底，使神经球与固定液充分接触，离心，弃上清；

（3）神经球通透及封闭：加入通透及封闭液，摇床上孵育30～60分钟，所述摇床的转速为50转/分钟；然后离心，弃上清；所述通透及封闭液，是由6% BSA溶液与1% Triton X-100溶液等体积混合而成；

（4）一抗孵育：加入适当稀释的一抗，并轻柔混匀，4℃环境下孵育8～12小时，离心，弃上清；

（5）漂洗：加入PBST重悬神经球，摇床清洗，离心，弃上清；重复若干次；

（6）二抗孵育：加入适当稀释的二抗，轻柔混匀，摇床孵育3小时，离心，弃上清；

（7）漂洗：加入PBST重悬神经球，摇床清洗，离心，弃上清；重复若干次；

（8）封片：加入PBS缓冲液，轻弹使神经球重悬，将重悬的神经球滴加于洁净的载玻片上，置于超净台中避光风干；于神经球处滴加一滴含DAPI的抗荧光淬灭剂，再加盖一张盖玻片，轻轻将神经球压平封片，用于荧光显微镜观察；

所述离心的具体参数为：400 g，离心5分钟。

2.根据权利要求1所述的神经球免疫荧光染色的方法，其特征在于，所述轻柔混匀的具体方式为：轻弹管底使神经球悬浮并轻柔颠倒混匀2～3次。

3.根据权利要求1所述的神经球免疫荧光染色的方法，其特征在于，所述一抗孵育的具体方式为：用3% BSA溶液进行抗体稀释，离心管斜放，保证神经球与抗体充分接触。

4.根据权利要求1所述的神经球免疫荧光染色的方法，其特征在于，所述摇床清洗的具体方式为：向离心管中加入PBST，轻弹管底使神经球悬浮并轻柔颠倒混匀2～3次，然后斜放至摇床。

5.根据权利要求1或4所述的神经球免疫荧光染色的方法，其特征在于：所述PBST为含有0.5% Triton X-100的PBS溶液。