[发明专利]一种通过免疫荧光检测药物对胰岛细胞摄脂影响的方法

权利要求书

1.一种通过免疫荧光检测药物对胰岛细胞摄脂影响的方法，其特征在于，按照以下步骤具体实施：

步骤1、将胰岛细胞培养长至3×10⁶～5×10⁶个，将胰岛细胞进行传代培养，传代培养后吸取一定量的细胞悬液，接种至共聚焦小皿，待细胞贴壁后进行饥饿处理，再用他汀类药物单剂量干预细胞；

步骤2、采用Dil-LDL孵育步骤1得到的细胞，再使用PBS清洗三次，再使用多聚甲醛固定，弃去液体，再用去离子进行水洗；

步骤3、使用DAPI对步骤2水洗后的细胞进行染色，染色后弃去液体，用去离子水洗3次，每次3min；

步骤4、将步骤3得到的细胞进行干燥处理；

步骤5、在荧光显微镜下观察步骤4得到的细胞摄入低密度脂蛋白胆固醇的情况。

2.如权利要求1所述的一种通过免疫荧光检测药物对胰岛细胞摄脂影响的方法，其特征在于，所述步骤1中传代培养为一传四培养，接种至共聚焦小皿中细胞的体积为500μL，饥饿处理时间为12h，干预细胞时间为48h。

3.如权利要求1所述的一种通过免疫荧光检测药物对胰岛细胞摄脂影响的方法，其特征在于，所述步骤1中胰岛细胞为胰岛β细胞MIN6细胞。

4.如权利要求1所述的一种通过免疫荧光检测药物对胰岛细胞摄脂影响的方法，其特征在于，所述步骤2中Dil-LDL孵育细胞的时间为4～6h，多聚甲醛的浓度为4％，多聚甲醛固定细胞的体积为1～2mL，多聚甲醛固定细胞的时间为20～30min，去离子水水洗的次数为3～5次，每次水洗5s。

5.如权利要求1所述的一种通过免疫荧光检测药物对胰岛细胞摄脂影响的方法，其特征在于，所述步骤3中DAPI染色的体积为1～2mL，DAPI染色的时间为5min。

6.如权利要求1所述的一种通过免疫荧光检测药物对胰岛细胞摄脂影响的方法，其特征在于，所述步骤4中干燥温度为40～80℃，干燥时间为2～5min。

7.如权利要求1所述的一种通过免疫荧光检测药物对胰岛细胞摄脂影响的方法，其特征在于，所述步骤5中进行荧光检测时，在共聚焦小皿盖子上划分九宫格区域进行荧光拍照。

8.如权利要求1～7任一项所述的一种通过免疫荧光检测药物对胰岛细胞摄脂影响的方法，其特征在于，所述步骤5中荧光检测的倍数为20倍镜，感光度为ISO800。