[发明专利]一种通过免疫荧光检测药物对胰岛细胞摄脂影响的方法

说明书

本发明公开了一种通过免疫荧光检测药物对胰岛细胞摄脂影响的方法，按照以下步骤具体实施：先将胰岛细胞培养长至3×10⁶～5×10⁶个，将胰岛细胞进行传代培养，传代培养后吸取一定量的细胞悬液，接种至共聚焦小皿，待细胞贴壁后进行饥饿处理，再用药物单剂量干预细胞；再采用Dil‑LDL孵育干预后的细胞，使用PBS清洗三次、使用多聚甲醛固定，弃去液体，用去离子进行水洗；水洗后使用DAPI染色，染色后弃去液体，用去离子水洗，水洗后对细胞进行干燥处理，并在荧光显微镜下观察细胞摄入低密度脂蛋白胆固醇的情况。本发明的实验过程采样均匀，结果可信度高。

技术领域

本发明属于基础医学科研设备技术领域，具体涉及一种通过免疫荧光检测药物对胰岛细胞摄脂影响的方法。

背景技术

血脂水平异常是引发糖尿病非常重要的因素之一。其中，低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)内流和胞内胆固醇蓄积是引起胰岛细胞功能紊乱的潜在危险因素。胰岛细胞功能受损会导致胰岛素分泌出现问题，绝对或相对不足时，会引起血糖上升甚至引发糖尿病。本发明是通过免疫荧光检测胰岛细胞摄入低密度脂蛋白的量，从而检测药物对胰岛细胞摄脂的影响。

发明内容

本发明的目的是提供一种通过免疫荧光检测药物对胰岛细胞摄脂影响的方法，通过此方法可以检测胰岛细胞摄入低密度脂蛋白胆固醇的情况。

本发明所采用的技术方案是，一种通过免疫荧光检测药物对胰岛细胞摄脂影响的方法，具体包括以下步骤：

步骤1、将胰岛细胞培养长至3×10⁶～5×10⁶个，将胰岛细胞进行传代培养，传代培养后吸取一定量的细胞悬液，接种至共聚焦小皿，待细胞贴壁后进行饥饿处理，再用他汀类药物单剂量干预细胞；

步骤2、采用Dil-LDL孵育步骤1得到的细胞，再使用PBS清洗三次，再使用多聚甲醛固定，弃去液体，再用去离子进行水洗；

步骤3、使用DAPI对步骤2水洗后的细胞进行染色，染色后弃去液体，用去离子水洗3次，每次3min；

步骤4、将步骤3得到的细胞进行干燥处理；

步骤5、在荧光显微镜下观察步骤4得到的细胞摄入低密度脂蛋白胆固醇的情况。

本发明的特点还在于，

步骤1中传代培养为一传四，接种至共聚焦小皿中细胞悬液的体积为500μL，饥饿处理时间为12h，干预细胞时间为48h。

步骤1中胰岛细胞为胰岛β细胞株MIN6细胞。

步骤2中Dil-LDL孵育细胞的时间为4～6h，多聚甲醛的浓度为4％，多聚甲醛固定细胞的体积为1～2mL，多聚甲醛固定细胞的时间为20～30min，去离子水水洗3～5次，每次5s。

步骤3中DAPI染色的体积为1～2mL，DAPI染色的时间为5min。

步骤4中干燥温度为40～80℃，干燥时间为2～5min。

步骤5中进行荧光检测时，在共聚焦小皿盖子上划分九宫格区域进行荧光拍照。

步骤5中荧光检测的倍数为20倍镜，感光度为ISO800。

本发明的有益效果是：本发明通过免疫荧光检测判断胰岛细胞摄入低密度脂蛋白胆固醇的变化，可以得出结论：胰岛细胞摄入低密度脂蛋白胆固醇增多，免疫荧光强度明显增大，并且本发明的实验过程采样均匀，结果可信度高。本发明的方法为检测胰岛功能提供了一种新的方法，在辅助科研实验及检验医学等方面具有很大的应用前景。

附图说明

图1为本发明通过显微镜检测拍照时的示意图；