[发明专利]一种测定人体神经丝轻链蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种测定人体神经丝轻链蛋白含量的磁微粒化学发光试剂盒及其制备方法，试剂盒包括：神经丝轻链蛋白测定R1试剂、R2试剂、磁分离试剂、校准品液系列和化学发光底物液。本发明采用的夹心法的反应模式，利用化学发光检测技术与磁微粒免疫分离技术相结合的原理，定量检测人血清、血浆或脑脊液等多种样本中的神经丝轻链蛋白含量，确保了检测的灵敏度，本试剂盒与传统试剂盒相比灵敏度高、无污染、特异性强、操作简单、并且对样品的前处理要求低、可检测样本类型广泛、可快速高通量检测大批量样本，便于临床试剂应用。本发明为临床检测人血清中的神经丝轻链蛋白提供了一种更准确、精确、方便、快捷和简单的方法。

技术领域

本发明涉及一种采用磁微粒化学发光技术和抗原-抗体结合技术检测人体神经丝轻链蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法。本发明属于医用诊断试剂领域。

背景技术

神经丝蛋白是神经元主要的细胞骨架蛋白，分别由神经丝蛋白轻链、中链和重链组成，特异性地表达于轴索和轴突。神经丝蛋白的主要功能是为轴突提供结构支持并调控神经轴突的生长直径，影响着神经传输的速率和准确性。神经丝蛋白轻链(neurofilamentlight，NFL)是神经丝蛋白中最重要的组成成分，分子量为68KDa，是轴索损伤的标志物。神经丝轻链组成了重链的骨架，重链聚集形成了神经丝纤维。由于直接的创伤或者缓慢的退化过程，受损的神经细胞内容物释放至周边的隔室，所以可以定量检测轴突蛋白。在多种退行性疾病如脑损伤、多发性硬化症、额颞痴呆和其他多种神经退行性疾的患者的神经丝轻链蛋白水平会有所升高。

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一种进行性发展的神经系统退行性疾病，临床中常以记忆障碍、人格及行为改变等痴呆表现为基本特征，65岁以后发病的称之为迟发性AD。随着全球人口老龄化，AD患者的人数快速增加，预计到2030年，全球AD患者将达到6,600万人，我国将超过1,600万人。与正常老年人相比，AD患者生活自理能力差，同时常伴有精神行为异常，给家庭和社会带来极大的负担，其花费超过了心肌梗死、癌症、中风的总和，给社会和家庭造成巨大压力。目前该病的病因未明，曾有研究报道AD与脑脊液中和血液中的神经丝蛋白含量有一定联系，尤其是与其中的轻链蛋白(neurofilamentlight，NFL)关系密切。因此，研究开发神经丝轻链蛋白诊断试剂盒具有非常重要的临床价值。

目前已知的神经丝轻链蛋白检测方法主要为酶联免疫吸附测定法、荧光免疫分析法。但是，这些方法仍存在灵敏度低、线性范围窄、结果不稳定等缺陷。

因此，目前尚需一种灵敏度高、操作简单、自动化程度高、结果稳定、成本低廉的神经丝轻链蛋白检测试剂盒和使用方法。

发明内容

本发明旨在开发一种灵敏度高、操作简单、自动化程度高、结果稳定、成本低廉的一种测定人体神经丝轻链蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法。

基于上述目的，本发明提供一种测定人体神经丝轻链蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒，包括：R1试剂、R2试剂、磁分离试剂、校准品液系列和化学发光底物液；其中，R1试剂为异硫氰酸荧光素标记的抗神经丝轻链蛋白单克隆抗体稀释液，R2试剂为碱性磷酸酶标记的抗神经丝轻链蛋白抗体稀释液，磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒稀释剂，校准品液系列为含有不同浓度神经丝轻链蛋白的抗原稀释液，化学发光底物液为碱性磷酸酶催化发光的底物液。

其中，优选的，所述R1试剂是由缓冲液稀释而成的浓度为0.3～0.9μg/mL的异硫氰酸荧光素标记的抗神经丝轻链蛋白单克隆抗体稀释液。