[发明专利]一种双靶修饰脂质体的制备方法

权利要求书

1.一种双靶修饰脂质体的制备方法，其特征是包括如下步骤：

步骤1）将靶分子分别连接到磷脂分子上，靶分子包括甘草次酸和花生凝集素，连接后分别得到DSPE-PEG₂₀₀₀-GA和DSPE-PEG₂₀₀₀-PNA；

步骤2）取步骤1）中得到的DSPE-PEG₂₀₀₀-GA和DSPE-PEG₂₀₀₀-PNA，与大豆磷脂、胆固醇溶于氯仿中，采用薄膜分散法制备空白脂质体；

步骤3）取步骤2）中得到的空白脂质体，采用硫酸铵梯度法制备载药脂质体。

2.如权利要求1所述的双靶修饰脂质体的制备方法，其特征是步骤1）中甘草次酸的连接具体包括如下流程：取0.1g 的DSPE-PEG₂₀₀₀-NH₂溶于2mL氯仿中，加入0.11g的甘草次酸、0.11g的EDC和0.055gDMAP，室温搅拌反应24h，用纯水洗2-4次，收集有机相，加入无水硫酸钠干燥，减压浓缩溶液，转移至200mL无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，将产物重复溶解沉淀2-4次，得到DSPE-PEG₂₀₀₀-GA。

3.如权利要求1所述的双靶修饰脂质体的制备方法，其特征是步骤1）中花生凝集素的连接具体包括如下流程：取0.05g花生凝集素溶于2mL PBS缓冲液中，PBS缓冲液pH值为7.4，在水浴加热条件下加入0.05g 的DSPE-PEG₂₀₀₀-NH₂至溶解完全，室温搅拌8h，然后将反应液转移至8000-14000Da的透析袋中透析纯化48h，收集溶液冷冻干燥后，得到DSPE-PEG₂₀₀₀-PNA。

4.如权利要求1所述的双靶修饰脂质体的制备方法，其特征是步骤2）具体的包括：

步骤2.1）称取磷脂、胆固醇、DSPE-PEG₂₀₀₀-GA和DSPE-PEG₂₀₀₀-PNA溶于氯仿中,质量比为磷脂：胆固醇：DSPE-PEG₂₀₀₀-GA：DSPE-PEG₂₀₀₀-PNA=16：4：1：1，脂质浓度为30mg/mL，水浴超声促溶；

步骤2.2）将步骤2.1）得到的脂质溶液转移至100mL的茄形瓶中旋蒸，去除氯仿并形成脂质薄膜；旋蒸条件为压力0.04MPa、温度35℃、转速30rpm。

5.如权利要求1所述的双靶修饰脂质体的制备方法，其特征是步骤3）具体的包括：

步骤3.1）将脂质薄膜加入4mL硫酸铵溶液进行水化，硫酸铵溶液浓度为70mg/mL，水化条件为温度50℃、转速40rpm、时间1h；

步骤3.2）将步骤3.1）得到的脂质体溶液经超声处理，超声功率5%、超声时间10min、超声2s停3s；

步骤3.3）将步骤3.2）得到的脂质体溶液依次过0.45μm滤膜三次、0.22μm的滤膜三次，然后置于8000-14000Da的透析袋中透析5h，得到空白脂质体；

步骤3.4）将步骤3.3）中所得空白脂质体，加入药溶液，药脂比为1：10，共同孵育，并置于8000-14000Da的透析袋中透析15h后即得到载药脂质体，孵育条件为转速40rpm、温度50℃、时间20min。