[发明专利]一种双靶修饰脂质体的制备方法

说明书

本发明涉及一种双靶修饰脂质体的制备方法，其包括：1）将靶分子分别连接到磷脂分子上，靶分子包括甘草次酸和花生凝集素，连接后分别得到DSPE‑PEG₂₀₀₀‑GA和DSPE‑PEG₂₀₀₀‑PNA；2）取步骤1）中得到的DSPE‑PEG₂₀₀₀‑GA和DSPE‑PEG₂₀₀₀‑PNA，与大豆磷脂、胆固醇溶于氯仿中，采用薄膜分散法制备空白脂质体；3）取步骤2）中得到的空白脂质体，采用硫酸铵梯度法制备载药脂质体。本发明将靶分子先连接到磷脂上，在制备脂质体时与大豆磷脂和胆固醇一起加入，连接效率高，操作简单，利于转化。利用本发明的方法得到的双靶修饰的脂质体提高了靶向效率，对肝癌细胞有明显抑制作用。

技术领域

本发明涉及靶向肿瘤药物研发领域，具体的说是一种双靶修饰的脂质体的制备方法。

背景技术

癌症是威胁人类健康的主要疾病，肝癌是继肺癌、大肠癌和胃癌后第四位致死癌症。肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma HCC)发病率较高，在全球范围约占原发性肝癌的90%，是威胁人类生命健康的主要癌症之一。药物对肿瘤选择性低且易发生多药耐药，现在常规的治疗癌症的方式有手术治疗、放射疗法和化学疗法，上述方法均存在诸多弊端。靶向给药给癌症治疗带来了新希望。

脂质体是磷脂分子在水相中形成的双层人工膜，可将水溶性药物包封于其内核，将脂溶性药物包载在其疏水层，其具有良好的靶向性、缓释性、无免疫原性和易降解的优点，在靶向给药载体方面具有广阔的应用前景。将脂质体表面连接特定的配体（如抗体、多肽、激素、糖），使其特异性靶向肿瘤细胞，而不波及肿瘤周围正常的组织细胞，具有毒副作用小、药物生物利用度高、疗效显著等优势，极大的改善患者生存质量。

甘草次酸（Glycyrrhetinic acid, GA）是从中药甘草中提取的五环三萜类化合物。在肝细胞表面存在大量GA的结合位点（GA-R），肝肿瘤细胞的GA-R表达量是相邻正常肝组织的1.5-5倍。花生凝集素（peanut agglutinin, PNA）是一种来源于花生果实的植物凝集素蛋白，是一种常见的营养物质，对多种酶具有良好的抗性。PNA可与MUC1的核心位点(Gal- β(1-3)GalNAc)结合。MUC1是一种大分子量的结构性跨膜糖蛋白，具有高度糖基化的胞外结构域、跨膜区和胞浆尾巴，在恶性肿瘤细胞表面高表达，被认为是肿瘤治疗最有潜力的靶点。

在文献《PNA修饰的载长春碱阳离子脂质体对Lewis肺肿瘤细胞的抗肿瘤活性体内外研究》（Li, Xue-tao, He, Mei-li, Zhou, Zhi-yan, et al. The antitumor activityof PNA modified vinblastine cationic liposomes on Lewis lung tumor cells: Invitro and in vivo evaluation[J]. International Journal of Pharmaceutics,2015, 487(1-2):223-233）中，作者采用花生凝集素做配体，制备了载长春新碱的阳离子脂质体，增强了非小细胞肺癌的摄入，对荷瘤小鼠的抗肿瘤效果较好，花生凝集素修饰的脂质体增强了靶向作用，提高了药物疗效。

在文献《新型甘草次酸修饰的载姜黄素阳离子脂质体体外及H22荷瘤小鼠体内的抗肿瘤活性》（Chang Mingxiang, Wu Meimei, Li Hanmin. Antitumor activities ofnovel glycyrrhetinic acid-modified curcumin-loaded cationic liposomes invitro and in H22 tumor-bearing mice[J]. Drug Delivery, 25:1, 1984-1995）中，作者采用甘草次酸作为配体，制备了载姜黄素的阳离子脂质体，甘草次酸修饰的载姜黄素阳离子脂质体比游离的姜黄素抑制HepG2细胞增殖效果好，明显改善了H22荷瘤小鼠的各项生化指标，姜黄素的抗肿瘤作用在甘草次酸修饰的阳离子脂质体中明显增强了。