[发明专利]一种基于三维微载体细胞复苏的方法

权利要求书

1.一种基于三维微载体的细胞复苏方法，包括如下步骤：将冻存细胞或冻存细胞微组织复溶后的细胞悬液接种至三维微载体上进行细胞复苏培养。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法为基于三维微载体的动态细胞复苏方法，包括如下步骤：

(A1)取三维微载体置于细胞培养容器内，加入细胞培养基，立刻进行下一步操作或进行处理1min以上；所述处理方法为静置或搅拌；

(A2)取冻存细胞或冻存细胞微组织于37℃复溶后的细胞悬液接种至(A1)制备的含有微载体的细胞培养容器内，然后加入细胞培养基调整微载体与培养基的比例至1mg：1～1000μL；将所述细胞培养容器置于搅拌器上并放入培养箱中进行搅拌；

(A3)完成(A2)后，继续搅拌培养细胞至完成细胞复苏。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：

所述步骤(A2)中，所述搅拌为恒速搅拌或变速交替式搅拌或变速循环式搅拌；

和/或

所述搅拌为顺时搅拌、逆时搅拌或交替方向搅拌；

和/或

所述搅拌时长为0.1至100小时；

和/或

所述搅拌速度为1-200rpm。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：

所述搅拌方式为如下(a)或(b)或(c)：

(a)静置1-4h，然后顺时循环变速搅拌1-24h，然后顺时恒速搅拌至96h；

(b)顺时循环变速搅拌1-24h，然后顺时恒速搅拌至96h；

(c)顺时恒速搅拌1-96h。

5.如权利要求1至4任一所述的方法，其特征在于：

步骤(A2)中，细胞接种于含有微载体的细胞培养容器中时，所述细胞数目和微载体的比例为5-100×10³个细胞/mg微载体。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法为基于三维微载体的静态细胞复苏方法，包括如下步骤：

(B1)静态培养容器和微载体准备：取三维微载体置于细胞培养容器内；

(B2)冻存细胞复溶及接种：取冻存细胞或冻存细胞微组织于37℃融化后接种至(B1)制备的含有微载体的静态培养容器内孵育20-240min；

(B3)完成(B2)后，继续培养细胞至完成细胞复苏。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：

步骤(B2)中，所述微载体和细胞数目的比例为5-100×10³个细胞/mg微载体。

8.根据权利要求1至7任一所述的方法，其特征在于：所述细胞为贴壁细胞。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述贴壁细胞为干细胞。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述干细胞为间充质干细胞。