[发明专利]基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法与应用

权利要求书

1.一种基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法，其特征在于，包括以下的步骤：

S1：培养盐藻，并从所述盐藻中提取盐藻外泌体；

S2：将S1中得到的盐藻外泌体与靶向多肽通过化学偶联方法反应，得到多肽偶联的盐藻外泌体；

S3：将S2所得多肽偶联的盐藻外泌体与药物通过电击法反应，生成基于盐藻外泌体靶向药物的递送载体。

2.如权利要求1所述的基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法，其特征在于，S1中提取盐藻外泌体的具体步骤包括：选取杜氏盐藻，在模拟天然海水中养殖，培养盐藻细胞至对数生长期，再采用差速离心法提取盐藻外泌体。

3.如权利要求2所述的基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法，其特征在于，培养盐藻细胞的上清液为离心去除死细胞和细胞碎片的上清液。

4.如权利要求1所述的基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法，其特征在于，S2中的化学偶联方法，具体包括以下步骤：

步骤1：将所述靶向多肽溶于DMSO溶液，并用Cy5标记后，得到多肽溶液；

步骤2：将所述盐藻外泌体用DiO染料标记，并溶于Traut’s试剂中，室温反应30min，得到巯基化的盐藻外泌体；

步骤3：将步骤1所得的多肽溶液溶于MBS溶液中，室温反应30min，然后与步骤2中所得巯基化的盐藻外泌体混合，室温反应1h，经离心，收集沉淀，再过滤，得到所述多肽偶联的盐藻外泌体。

5.如权利要求4所述的基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法，其特征在于，步骤1中多肽DMSO溶液的浓度为10-50μg/mL。

6.如权利要求4所述的基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法，其特征在于，DiO染料标记的所述盐藻外泌体在所述Traunt’s试剂中的终浓度为250μM；

所述多肽溶液在MBS溶液中的终浓度为200μM。

7.如权利要求1所述的基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法，其特征在于，S3中所述药物为基因药物或化学药物，所述药物与所述多肽偶联的盐藻外泌体的质量比为1:100；

所述电击法的条件为：电压100-700v，电容125-500μF，放电时间1-5ms，放电次数1-2次；

电击后，还包括离心、收集沉淀、过滤纯化的步骤。

8.如权利要求4或7所述的基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法，其特征在于，在100000g条件下超速离心90min，收集沉淀后，用PBS溶液重悬沉淀，过PD-10过滤柱纯化。

9.一种利用如权利要求1-8任一项所述的基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法制备的复合盐藻外泌体。

10.一种如权利要求9所述的复合盐藻外泌体在制备抗肿瘤药物的递送载体中的应用。