[发明专利]基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法，包括以下的步骤：S1：培养盐藻，并从所述盐藻中提取盐藻外泌体；S2：将S1中得到的盐藻外泌体与靶向多肽通过化学偶联方法反应，得到靶向多肽偶联的盐藻外泌体；S3：将S2所得靶向多肽偶联的盐藻外泌体与药物通过电击法反应，生成基于盐藻外泌体靶向药物的递送载体。还公开了该制备方法制备的复合盐藻外泌体，以及复合盐藻外泌体的应用。本发明的制备方法以盐藻为来源获取的外泌体，来源丰富，操作简便，并且制备的递送载体可以精准靶向目的部位以及发挥基因和化学药物的治疗作用，为之后的临床应用研究提供了可靠的实验研究数据以及理论基础。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法与应用。

背景技术

随着生物医学技术的发展，纳米级药物输送系统已经获得了令人瞩目的进展，各种基于纳米的药物制剂已被用于改善化学和生物分子药物的治疗功效。使用纳米药物载体进行癌症治疗的研究正在广泛进行，但是作为药物载体针对药物的装载尤其是基因治疗药物受限于弱靶向性，易于降解，从而影响疗效。因此，开发安全、高效、靶向的药物递送系统是实现肿瘤有效治疗的关键。

目前，常规使用的是合成的基于有机、无机材料的药物载体，在使用过程中观察到各种问题，包括毒性，免疫反应和快速清除。外泌体是指包含了多种RNA和蛋白质及脂质分子的小膜泡(30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡；多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。外泌体具有纳米级尺寸，并且与受体细胞能很好的特异性结合，因此，通过使用外泌体递送来克服常规合成的药物载体的缺陷，已经成为了药物递送系统的研究热点，外泌体是一种理想的药物载体。然而，作为细胞分泌物的exosome，其来源与母细胞直接相关。不同细胞来源的外泌体，其组分有很大差异。因此，其稳定性、均一性，以及多组分的可控性均难以保证。更重要的是：目前，很难制备出大量的外泌体以满足临床试验的需要。为克服上述诸多不足，我们选择一种新型生物反应器——盐藻作为表达系统来大量生产外泌体作为靶向递送的载体。

盐藻外泌体来源于杜氏盐藻，杜氏盐藻是一种嗜盐的单细胞真核藻类，是迄今为止发现的最耐盐的真核生物之一，无毒无害，可直接作为一种天然保健品用以提高机体抵抗力和免疫力；盐藻属于单细胞真核藻类，具有转录和翻译后对蛋白加工的能力，能产生接近天然的高活性蛋白。盐藻中还含有丰富的β-胡萝卜素、不饱和脂肪酸、维生素E、叶绿素和硒等活性成分，具有较好的抗氧化、抗衰老效果。随着分子遗传学和基因工程理论水平和实验技术的发展，藻类基因工程得到了很快的发展，目前根据藻类基因工程已经成功构建高产、优质、抗逆的藻类新品种，用于生产大量的、廉价的蛋白和药物。基于上述这些优点，盐藻可以作为新型生物反应器来大量生产外泌体作为靶向递送的载体。而转基因盐藻植株来源的外泌体，与其他来源的外泌体相比，具有生物毒性小、高修饰性、转化稳定性等优点，为此，本发明选择盐藻作为生物反应器，大量产出盐藻外泌体以作为药物载体，公知的，对于各种肿瘤的治疗，都需要建立“点对点”精准治疗体系，为了达到对肿瘤治疗和诊断的协同性及一致性，所产出的盐藻外泌体在体外同时负载具有靶向功能的多肽和基因药物，通过优化、改进实验条件，制备一种新型的基于盐藻外泌体靶向药物递送载体，克服现有技术中常规递送载体存在的问题。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法，通过化学偶联方法和电击法结合，使得盐藻外泌体同时负载靶向多肽和肿瘤治疗药物，可以精准靶向以及提高基因药物的表达。

本发明还有一个目的是提供一种利用基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法制备的复合盐藻外泌体，能够实现特异靶向肿瘤以及具有保护基因药物或化学药物的特性。

本发明还有一个目的是提供一种复合盐藻外泌体在递送抗肿瘤药物中的应用，可以实现药物对肿瘤的点对点治疗，利于及时评估诊断和和治疗的协同性和一致性。