[发明专利]一种非洲猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供了一种非洲猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒，该试剂盒的支持介质上包被有非洲猪瘟病毒抗原，该非洲猪瘟病毒抗原为非洲猪瘟病毒Δp54蛋白和/或pK205R蛋白；Δp54蛋白如SEQ ID NO.1所示，pK205R蛋白如SEQ ID NO.2所示。本发明的非洲猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒特异性、重复性、灵敏度良好，包被了两种抗原的试剂盒灵敏度可与间接免疫荧光检测灵敏度相当，能在感染早期较低抗体水平下检测到抗体阳性，为临床猪群感染情况提供依据，对于预防和控制非洲猪瘟病毒感染具有重要作用。

技术领域

本发明属于免疫测定法领域，具体涉及一种非洲猪瘟病毒抗体ELISA试剂盒及其制备。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的猪的一种急性、热性、高度接触的烈性传染性疾病。其特征为病程短、病死率高，可高达100％，临床症状和病理变化均类似于急性猪瘟，在诊断时极易误诊，表现高热、皮肤充血发绀、流产、水肿及脏器出血。

该病在我国被列为一类动物疫病，属于世界动物卫生组织(OIE)的法定报告动物疫病。我国于2018年报告了首例非洲猪瘟病例，并迅速传播到各个省(区)。中国的生猪数量占全球的50％，ASFV在中国的传播，严重威胁着世界养殖业。迄今为止，非洲猪瘟主要的诊断是在病毒基因检测的基础上，通过RT-PCR和部分基因组序列分析进行的，耗时长，不能及时给出是否感染的准确判断，因此，临床上急需开发出快速准确有效的ELISA检测试剂产品。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供了一种非洲猪瘟病毒抗体检测ELISA试剂盒，以及该试剂盒的制备及应用。

本发明的第一方面是一种非洲猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒，其中，所述试剂盒的支持介质上包被有非洲猪瘟病毒抗原，所述非洲猪瘟病毒抗原为非洲猪瘟病毒Δp54蛋白和/或pK205R蛋白；所述Δp54蛋白如SEQ ID NO.1所示，所述pK205R蛋白如SEQ ID NO.2所示。

本发明试剂盒意外的选取了极低的抗原含量进行包被，不仅检测灵敏度较高，且极大降低了背景值，检测结果更准确。本发明包被两种抗原的试剂盒其灵敏度与间接免疫荧光检测相当，能在早期较低抗体水平下检测到抗体阳性，为临床猪群感染情况提供依据，对于预防和控制非洲猪瘟病毒感染具有重要作用。

作为本发明的一种实施方式，本发明的所述的非洲猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒中，所述支持介质为96孔酶标板，所述非洲猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒还包括样品稀释液、洗涤液、封闭液、羊抗猪酶标二抗、显色剂A液、显色剂B液、终止液、阳性猪血清对照以及阴性猪血清对照。

作为本发明的一种优选实施方式，本发明的所述的非洲猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒中，所述样品稀释液为含有氯化钠8g、磷酸氢二钠2.9g、磷酸二氢钾0.24g、氯化钾0.2g、纯化水600ml、Proclin300 1ml、新生牛血清200ml、PUR染料0.028g混匀，用纯化水定容至1000ml；所述洗涤液为含有氯化钠8g、磷酸氢二钠2.9g、磷酸二氢钾0.12g、氯化钾0.2g、吐温20 0.5ml、纯化水800ml混匀，补加纯化水定容至1000ml；所述封闭液为1％W/VBSA的磷酸盐缓冲液、5％W/V脱脂奶粉的磷酸盐缓冲液、1.5％V/V明胶的磷酸盐缓冲液或20％V/V新生牛血清磷酸盐缓冲液；所述显色液包括显色剂A液和显色剂B液，所述显色剂A液含磷酸氢二钠14.7g、柠檬酸9.3g、过氧化脲0.3g，溶于800ml纯化水混匀，补加纯化水定容至1000ml；所述显色液B含四甲基联苯二胺(TMB)0.2g，无水乙醇10ml，溶于800ml纯化水混匀，补加纯化水定容至1000ml；所述终止液为2M的H₂SO₄。