[发明专利]一种HPLC-DAD测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷含量的方法

说明书

本发明属于中药活性成分检测定量分析领域，公开了一种HPLC‑DAD测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷含量的方法。具体包括以下步骤：(1)粗糙凤尾蕨的采集、干燥及粉碎；(2)木犀草苷标准品的配制及标准曲线的绘制；(3)样品溶液的制备；(4)样品溶液中木犀草苷含量的测定。该测定方法操作简便、灵敏度高、重复性好，可以快速精确地测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷的含量，为准确评估和有效控制粗糙凤尾蕨的质量提供了科学依据。

技术领域

本发明属于中药活性成分检测定量分析领域，本发明涉及一种HPLC-DAD测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷含量的方法。

背景技术

粗糙凤尾蕨Pteris cretica var.laeta(Wall.ex Ettingsh.)为凤尾蕨科凤尾蕨属植物欧洲凤尾蕨(Pteris cretica)的变种，生长于海拔900-2600米的酸性土壤，主要分布在我国云南、四川、广西、广东、福建、江西等地；另外在越南、柬埔寨、尼泊尔、印度等地也有分布。粗糙凤尾蕨具有较高的观赏价值和药用价值，该植物味苦性寒，以全草入药，民间用于消炎、止痢，舒筋、止痛。但是，目前关于粗糙凤尾蕨化学成分的研究尚处于较初步阶段，对有效成分的定性定量分析未见报道。

木犀草苷(木犀草素-7-O-葡萄糖苷)为粗糙凤尾蕨的主要有效成分，现代药理要研究表明木犀草苷具有平喘、保肝、抗肿瘤、抗真菌、抗氧化和治疗糖尿病、保护心脏等多种药理作用。但是，粗糙凤尾蕨的化学成分复杂，对木犀草苷的分离存在一定的困难，在检测时要将目标成分与杂质分开，色谱条件的优化非常困难。因此，开发一种操作简便、高效快速、精准可靠、重复性好的测定方法对粗糙凤尾蕨中木犀草苷的含量进行分析，对粗糙凤尾蕨药材的质量控制及开发利用具有极其重要的意义。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种HPLC-DAD测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷含量的方法，该测定方法操作简便、灵敏度高、重复性好，可以快速精确地测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷的含量，为准确评估和有效控制粗糙凤尾蕨的质量提供了科学依据。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：

一种HPLC-DAD测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷含量的方法，具体包括以下步骤：

(1)样品的制备：采集粗糙凤尾蕨药材，进行清洗、干燥、粉碎及筛分；

(2)供试品溶液的制备：称取粗糙凤尾蕨粉末并采用超声辅助提取，得供试品溶液；

(3)对照品储备液的配制：精确称量木犀草苷对照品，并用乙醇配制成一系列不同浓度的对照品溶液；

(4)标准曲线的绘制：取不同浓度的对照品溶液进行HPLC-DAD检测分析，获得不同浓度对照品溶液下的峰面积，将浓度与峰面积进行线性回归分析，得标准曲线回归方程；

(5)供试品溶液中木犀草苷含量测定：取供试品溶液进行HPLC-DAD检测分析，获得供试品溶液中木犀草苷的峰面积，然后根据木犀草苷的标准曲线回归方程的计算木犀草苷的含量。

所述步骤(1)中采集粗糙凤尾蕨植株的组织样品材料，用去离子水清洗，干燥至恒重后粉碎过100目筛。

所述步骤(2)中称取步骤(1)所得的样品粉末2.0g，加入100mL的70％乙醇溶液，在60℃下超声(200W，40KHz)提取45min，冷却至室温后，用70％乙醇溶液补充损失的提取溶液，然后过滤，取滤液1mL过0.45μm有机微孔滤膜，即得供试品溶液。

所述步骤(3)中取木犀草苷对照品14.2mg，置于100mL容量瓶中，加乙醇溶解并定容至刻度，完全溶解摇匀后得到对照品储备液A(0.142mg/mL)；然后，分别量取1、2、3、4、5、6mL的对照品储备液A，置于25mL的容量瓶中，加乙醇溶解并定容至刻度，摇匀后得到一系列标准品储备液(5.68、11.36、17.04、22.72、28.4、34.08μg/mL)。