[发明专利]一种区分大白猪和贵州地方猪品种的DKK2基因中结构变异SV91及其检测技术在审
| 申请号： | 201910819723.7 | 申请日： | 2019-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN110373481A | 公开（公告）日： | 2019-10-25 |
| 发明（设计）人： | 冉雪琴;王嘉福;牛熙;卢圣菲 | 申请（专利权）人： | 贵州大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 吴无惧 |
| 地址： | 550025 贵州省贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测技术 结构变异 地方猪 基因型 插入的基因 插入基因 等位基因 检测样品 抑制因子 基因 基因组 内含子 中结构 参考 应用 发现 | ||
1.一种区分大白猪和贵州地方猪品种的DKK2基因中结构变异SV91分子标记，其特征在于：SV91结构变异为猪参考基因组插入91bp，位于WNT信号通路抑制因子2基因内含子1中，区间为chr8：114875181-114875271，SV91的两种等位基因设为I和D，三种基因型分别命名为II、DI和DD型，其中II为纯合插入基因型、DD为正常基因型、DI为杂合插入的基因型。
2.根据权利要求1所述的一种区分大白猪和贵州地方猪品种的结构变异SV91分子标记，其特征在于：SV91分子标记的引物，分别为：上游引物DKK2-F：5’-GCTATGGTCACAGCCAACAAAC-3’，下游引物DKK2-R：5’-AAATGGCTAAATGGCTAAGGGC-3’。
3.如权利要求1-2之一所述的一种区分大白猪和贵州地方猪品种的DKK2基因中结构变异SV91分子标记的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)提取待测大白猪和贵州地方猪品种的基因组DNA；(2)以待测猪品种的基因组DNA为模板，分别利用引物DKK2-F、DKK2-R，进行PCR检测，分析SV的基因型；(3)1.5％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，凝胶成像系统记录条带并判断基因型。
4.根据权利要求3所述的一种区分大白猪和贵州地方猪品种的结构变异SV91分子标记的检测方法，其特征在于：步骤(2)中进行PCR所使用的扩增体系为10μL，分别为：2×TaqPCR MasterMix 5μL，10μmoL/L引物DKK2-F、DKK2-R各0.1μL，10ng/μL基因组DNA 1μL，ddH2O3.8μL；进行PCR采用的反应条件：1)预变性：95.0℃5min；2)扩增反应：变性：95.0℃30sec，退火：60℃1min，延伸：72.0℃1min，30个循环；72.0℃10min，4℃保存。
5.如权利要求1或2所述的一种区分大白猪和贵州地方猪品种的DKK2基因中结构变异SV91分子标记的运用方法，其特征在于：所述的分子标记在区分大白猪和贵州地方猪品种的结构变异SV91中的使用方法，包括以下步骤：(1)采用PCR技术检测SV91在群体中的基因型分布；(2)应用SPSS v20.0中的卡方检验进行双侧检验，分析大白猪与贵州地方猪品种的SV91的基因型分布频率；(3)根据个体基因型和SV91的等位基因频率区分大白猪和贵州地方猪品种。
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