[发明专利]羧甲基化莲藕多糖-曲古霉素A轭合物的制备方法

权利要求书

1.一种羧甲基化莲藕多糖-曲古霉素A轭合物的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

将羧甲基化莲藕多糖均匀分散在磷酸盐缓冲液中，然后依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、聚乙烯亚胺-聚乙二醇共聚物并混合均匀，避光下反应得到反应液，羧甲基化莲藕多糖、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、聚乙烯亚胺-聚乙二醇共聚物的重量比为(40-60)：(6-10)：(40-60)；

将所述反应液转移至透析袋，进行流水透析处理，取保留液离心，弃去上清液，将沉淀物干燥处理得到羧甲基化莲藕多糖复合物；

将羧甲基化莲藕多糖复合物接枝叶酸，得到羧甲基化莲藕多糖－叶酸复合物；

将羧甲基化莲藕多糖－叶酸复合物接枝曲古霉素A，得到羧甲基化莲藕多糖-曲古霉素A轭合物；

将羧甲基化莲藕多糖复合物接枝叶酸，得到羧甲基化莲藕多糖-叶酸复合物的步骤包括：

将叶酸溶解在三乙胺和二甲基亚砜的混合液中，得第一混合溶液；

将N，N-二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺溶解在二甲基亚砜中，得第二混合溶液；

将所述第二混合溶液加入到所述第一混合溶液中，避光反应，得到叶酸活性酯；

将羧甲基化莲藕多糖复合物和叶酸活性酯溶解在二甲基亚砜中，避光反应，得到羧甲基化莲藕多糖-叶酸复合物；

叶酸、N，N-二环己基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的重量比为(30-50):(15-25):(8-12)；

羧甲基化莲藕多糖复合物和叶酸活性酯的重量比为(18-22):(6-9)。

2.如权利要求1所述的羧甲基化莲藕多糖-曲古霉素A轭合物的制备方法，其特征在于，将羧甲基化莲藕多糖均匀分散在磷酸盐缓冲液中，然后分别加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、聚乙烯亚胺-聚乙二醇共聚物并混合均匀，避光下反应得到反应液的步骤中：反应时间为24-48h；和/或，

将所述反应液转移至透析袋，进行流水透析处理的步骤中：流水透析处理的时间为24～48h。

3.如权利要求1所述的羧甲基化莲藕多糖-曲古霉素A轭合物的制备方法，其特征在于，将所述第二混合溶液加入到所述第一混合溶液中，避光反应，得到叶酸活性酯的步骤中：反应时间为8-16h；和/或，

将羧甲基化莲藕多糖复合物和叶酸活性酯溶解在二甲基亚砜中，避光反应，得到羧甲基化莲藕多糖-叶酸复合物的步骤中：反应时间为8-16h。

4.如权利要求1所述的羧甲基化莲藕多糖-曲古霉素A轭合物的制备方法，其特征在于，将羧甲基化莲藕多糖-叶酸复合物接枝曲古霉素A，得到羧甲基化莲藕多糖-曲古霉素A轭合物的步骤包括：

将羧甲基化莲藕多糖-叶酸复合物溶于二甲基亚砜中，得待反应液；

将曲古霉素A的二甲基亚砜溶液加入到所述待反应溶液中，反应得羧甲基化莲藕多糖-曲古霉素A轭合物。

5.如权利要求4所述的羧甲基化莲藕多糖-曲古霉素A轭合物的制备方法，其特征在于，将曲古霉素A的二甲基亚砜溶液加入到所述待反应溶液中，反应得羧甲基化莲藕多糖-曲古霉素A轭合物的步骤中：反应时间为8-16h。