[发明专利]一种用于催化制备非天然氨基酸的苯丙氨酸脱氢酶及其应用有效
| 申请号： | 201910822218.8 | 申请日： | 2019-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN110592037B | 公开（公告）日： | 2021-03-30 |
| 发明（设计）人： | 王世珍;王世燕;任红 | 申请（专利权）人： | 厦门大学 |
| 主分类号： | C12N9/06 | 分类号： | C12N9/06;C12P13/04;C12P13/22 |
| 代理公司： | 厦门市首创君合专利事务所有限公司 35204 | 代理人： | 张松亭;姜谧 |
| 地址： | 361000 *** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 催化 制备 天然 氨基酸 苯丙氨酸 脱氢酶 及其 应用 | ||
1.一种用于催化制备非天然氨基酸的苯丙氨酸脱氢酶，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1、2、3或4所示。
2.一种非天然氨基酸的催化制备方法，其特征在于：其催化体系包括：将底物和NAD+溶解于pH＝9-11的甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液中，接着加入10-30％的助溶剂，使得底物的浓度为10～500mM，然后加入权利要求1所述的苯丙氨酸脱氢酶的酶液至该苯丙氨酸脱氢酶浓度为20-200U/L，于10-70℃并搅拌条件下进行反应10-100h。
3.如权利要求2所述的催化制备方法，其特征在于：其催化体系包括：将底物、甘油和NAD+溶解于pH＝9-11的甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液中，接着加入10-30％的助溶剂，使得甘油的浓度为0.5-3M，NADH浓度为0.2-20mM，底物的浓度为10～500mM，然后加入所述苯丙氨酸脱氢酶的酶液和甘油脱氢酶的酶液至该苯丙氨酸脱氢酶和该甘油脱氢酶的浓度分别为20-200U/L和50-150U/L，于10-70℃并搅拌条件下进行反应10-100h。
4.如权利要求3所述的催化制备方法，其特征在于：所述助溶剂为十二烷基硫酸钠、吐温-80、吐温-60、司盘-80、司盘-60、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、四氢呋喃、二甲基亚砜、乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、乙醚、甲苯、二氧六环、石油醚、正戊烷、环戊烷、正己烷、环己烷和正庚烷中的至少一种。
5.如权利要求3或4所述的催化制备方法，其特征在于：所述甘油脱氢酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.05所示。
6.如权利要求2所述的催化制备方法，其特征在于：其催化体系包括：将甲酸钠和NAD+溶解于pH＝9-11的甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液中，接着加入10-30％的助溶剂，使得甲酸钠的浓度为20-500mM，NADH浓度为0.2-20mM，底物的浓度为10～500mM，然后加入所述苯丙氨酸脱氢酶的酶液和甲酸脱氢酶的酶液至该苯丙氨酸脱氢酶和该甲酸脱氢酶的浓度分别为20-200U/L和50-150U/L，于10-70℃并搅拌条件下进行反应10-100h。
7.如权利要求6所述的催化制备方法，其特征在于：所述助溶剂为十二烷基硫酸钠、吐温-80、吐温-60、司盘-80、司盘-60、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、四氢呋喃、二甲基亚砜、乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、乙醚、甲苯、二氧六环、石油醚、正戊烷、环戊烷、正己烷、环己烷和正庚烷中的至少一种。
8.如权利要求6或7所述的催化制备方法，其特征在于：所述甲酸脱氢酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.06所示。
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