[发明专利]PRP产品及制备方法、PRP与调节性T细胞复合制剂及应用

说明书

本发明公开了一种PRP产品及其制备方法、复合制剂及应用。该PRP产品是将全血原料经过超声波处理后分离收集上层富含血小板的血浆得到的，无需经过多次离心处理，整个制备过程操作简单、效率高，并且可以避免多次离心操作带来的人为污染和误差以及回收率低等问题，制备过程中无需使用凝血酶、胶原蛋白或氯化钙等外源物质，得到的PRP产品安全性高。该复合制剂通过将上述PRP产品与CD4+CD25+调节性T细胞悬液混合，二者混合培养无冲突，在发挥PRP产品和CD4+CD25+调节性T细胞各自对KOA的治疗效果的同时，PRP产品可以促进CD4+CD25+调节性T细胞的生长增殖，进而进一步有利于提高CD4+CD25+调节性T细胞对KOA的治疗效果。

技术领域

本发明涉及生物制剂技术领域，尤其是涉及一种PRP产品及制备方法、PRP与调节性T细胞复合制剂及应用。

背景技术

随着世界范围内人口老龄化的日益严重，膝关节骨关节炎(kneeosteoarthritis，KOA)的发病率也逐年增高。有效的预防和治疗KOA已成为改善中老年人生活质量的关键所在。对于KOA的治疗，依然遵循着金字塔式的阶梯治疗原则。如何延缓KOA的发展，避免患者行胫骨近端高位截骨术、单间室置换术以及全膝关节表面置换术等手术治疗方式，采用更加微创的方式延缓骨关节炎的进展，是当前迫切需要解决的问题。

研究发现，PRP(Platelet-rich plasma，高浓度血小板血浆，指利用自身全血经过分离制备所得到的富含血小板的血液)含有大量的生长因子，如血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor，PDGF)、肿瘤转化因子β(tumor transformationfactor-β，TGF-β)、胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor，IGF)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)等。这些细胞因子主要存在于血小板中的α颗粒内，当这些因子释放出来后，可促进各种软硬组织的再生和修复。目前，临床上PRP也逐步被用于治疗KOA，取得了一定的成效。

目前上市的PRP产品大多通过两步或三步离心法制备，整个流程时间长，操作繁琐，并且中间需要数次开放操作，容易出现人为带入污染和误差的风险。另外血小板激活剂一般使用凝血酶、胶原蛋白或CaCl₂，都属于添加了外源物质，容易带来额外风险，例如凝血酶一般源于牛，极易带来牛源病毒污染风险。再者，每次离心分离都会带来血小板损失，总回收率不会太高，影响了PRP的浓度和治疗效果。

发明内容

基于此，有必要提供一种操作时间短、污染小、安全性高且有利于提高血小板回收率的PRP产品及其制备方法和应用。

此外，还有必要提供一种含有上述PRP产品的PRP与调节性T细胞复合制剂及其应用。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下。

一种PRP产品的制备方法，包括如下步骤：

对全血原料进行超声波处理；

取出上层血浆，进行离心处理；

去除上层的乏血小板血浆，收集剩余的血浆，混匀。

在其中一个实施例中，在对全血原料进行超声波处理时，超声波的输出频率为4.0MHz～5.0MHz，声压小于等于0.05Mpa，持续8min～12min。

在其中一个实施例中，所述PRP产品的制备方法还包括对收集的剩余的血浆再次进行超声波处理，激活血小板的步骤。

在其中一个实施例中，在对收集的剩余的血浆再次进行超声波处理激活血小板时，超声波的输出频率为1.0MHz～1.2MHz，作用时间为1.5min～2.5min，总强度为800W/cm²～1200W/cm²。