[发明专利]一种细胞制剂的微生物安全性评价试剂盒及应用

权利要求书

1.一种细胞制剂的微生物安全性评价试剂盒，其特征在于：该试剂盒包含检测支原体、衣原体、真菌和原核菌的引物探针组。

2.根据权利要求1所述的细胞制剂的微生物安全性评价试剂盒，其特征在于：所述的引物探针组分为四组，分别为真菌/支原体组、真菌/衣原体组、原核菌/支原体组、原核菌/衣原体组；

所述的真菌/支原体组包括FU引物对、FU探针、MY引物对和MY探针，

所述的真菌/衣原体组包括FU引物对、FU探针、CH引物对和CH探针，

所述的原核菌/支原体组包括EC引物对、EC探针、MY引物对和MY探针，

所述的原核菌/衣原体组包括EC引物对、EC探针、CH引物对和CH探针。

3.根据权利要求2所述的细胞制剂的微生物安全性评价试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒上设有4个试孔，所述的真菌/支原体组、真菌/衣原体组、原核菌/支原体组、原核菌/衣原体组分别位于对应的试孔中。

4.根据权利要求2所述的细胞制剂的微生物安全性评价试剂盒，其特征在于：每种引物的反应终浓度为200-300nM，每种探针的反应终浓度为80-120nM。

5.一种检测支原体、衣原体、真菌和原核菌的引物探针组，其特征在于：该引物探针组包括FU引物对、FU探针、EC引物对、EC探针、MY引物对、MY探针、CH引物对和CH探针；

其中，所述的FU引物对包括FU正向引物与FU反向引物：

FU正向引物序列：ACAGAGTTCATGCCCTCACG，

FU反向引物序列：TTTGGGTTTCCTCTGGCAGG；

所述的FU探针序列：fam-GCTTTGGCAGGCCGTGGAAACAC-tamra；

所述的EC引物对包括EC正向引物与EC反向引物：

EC正向引物序列：GGCGCATACAAAGAGAAGCG，

EC反向引物序列：CTCCAATCCGGACTACGACG；

所述的EC探针序列：fam-TCGCGAGAGCAAGCGGACCT-tamra；

所述的MY引物对包括MY正向引物与MY反向引物：

MY正向引物序列：GCCTTGACGGTACCTTGTCA，

MY反向引物序列：GCCCCAAGTTTTAACGCCAG；

所述的MY探针序列：cy3-GCAACGGCTAACTATGTGCCA-BHQ3；

所述的CH引物对包括CH正向引物与CH反向引物：

CH正向引物序列：AAGAAGCACCGGCTAACTCC，

CH反向引物序列：ACGCCCTTTACGCCCAATAA；

所述的CH探针序列：cy3-TGCCAGCAGCTGCGGTAATA-BHQ3。

6.一种检测支原体、衣原体、真菌和原核菌的方法，其特征在于：所述的方法基于权利要求1-4中任一项所述的试剂盒，具体包括如下步骤：

(1)提取待测样本的DNA；

(2)分别使用四组引物探针组进行实时PCR反应检测支原体、衣原体、真菌和原核菌。

7.根据权利要求6所述的检测支原体、衣原体、真菌和原核菌的方法，其特征在于：所述的实时PCR反应条件为：预变性：94℃反应15min，变性：94℃反应15s，复性：60℃反应10s，延伸：72℃反应15s，反应循环为40个循环。

8.根据权利要求6所述的检测支原体、衣原体、真菌和原核菌的方法，其特征在于：所述的实时PCR反应的反应液包括：模板DNA 1ul，2种正向引物共2ul，2种反向引物共2ul，2种探针共1ul，2*PCR混合溶液10ul，ddH₂O 3ul，合计20ul。

9.一种权利要求1-4中任一项所述的细胞制剂的微生物安全性评价试剂盒在临床制剂领域中的应用。

10.根据权利要求9所述的细胞制剂的微生物安全性评价试剂盒的应用，其特征在于：所述的细胞制剂的微生物安全性评价试剂盒在细胞制剂领域中的应用。