[发明专利]一种细胞制剂的微生物安全性评价试剂盒及应用

说明书

本发明提供了一种细胞制剂的微生物安全性评价试剂盒及应用，试剂盒包括检测支原体、衣原体、真菌和原核菌的引物探针组，该引物探针组包括FU引物对、FU探针、EC引物对、EC探针、MY引物对、MY探针、CH引物对和CH探针。本发明所述的细胞制剂的微生物安全性评价试剂盒具有良好的扩增，灵明度高，已经测试的标本中可低至2000copy/ml。

技术领域

本发明属于生物医药领域，尤其是涉及一种细胞制剂的微生物安全性评价试剂盒及应用。

背景技术

细胞治疗制剂在回输病人体内之前，通常应鉴定其是否安全。目前常用的测试方案是利用菌平皿涂布的方式测定是否有大肠杆菌等原核生物的污染。用这一方法检测有着明显的缺陷：1、测定周期长，通常需要培养过夜；2、观测的指标有限，仅测定细菌的污染，而支原体、衣原体、真菌等均被忽视。

现在临床多采用的菌落平板计数法是这样的：将待测样品制成均匀的系列稀释液，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内37℃培养过夜，次日根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞，来判定是否有细菌污染。该方法周期长，不利于长期检测。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种细胞制剂的微生物安全性评价试剂盒及应用，试剂盒良好扩增，灵明度高。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种细胞制剂的微生物安全性评价试剂盒，该试剂盒包含检测支原体、衣原体、真菌和原核菌的引物探针组。

进一步，所述的引物探针组分为四组，分别为真菌/支原体组、真菌/衣原体组、原核菌/支原体组、原核菌/衣原体组；

所述的真菌/支原体组包括FU引物对、FU探针、MY引物对和MY探针，

所述的真菌/衣原体组包括FU引物对、FU探针、CH引物对和CH探针，

所述的原核菌/支原体组包括EC引物对、EC探针、MY引物对和MY探针，

所述的原核菌/衣原体组包括EC引物对、EC探针、CH引物对和CH探针。

进一步，所述的试剂盒上设有4个试孔，所述的真菌/支原体组、真菌/衣原体组、原核菌/支原体组、原核菌/衣原体组分别位于对应的试孔中。

进一步，每种引物的反应终浓度为200-300nM，每种探针的反应终浓度为80-120nM。

一种检测支原体、衣原体、真菌和原核菌的引物探针组，该引物探针组包括FU引物对、FU探针、EC引物对、EC探针、MY引物对、MY探针、CH引物对和CH探针；

其中，所述的FU引物对包括FU正向引物与FU反向引物：

FU正向引物序列：ACAGAGTTCATGCCCTCACG，

FU反向引物序列：TTTGGGTTTCCTCTGGCAGG；

所述的FU探针序列：fam-GCTTTGGCAGGCCGTGGAAACAC-tamra；

所述的EC引物对包括EC正向引物与EC反向引物：

EC正向引物序列：GGCGCATACAAAGAGAAGCG，

EC反向引物序列：CTCCAATCCGGACTACGACG；

所述的EC探针序列：fam-TCGCGAGAGCAAGCGGACCT-tamra；

所述的MY引物对包括MY正向引物与MY反向引物：