[发明专利]一种适用地中海贫血和镰刀型贫血基因治疗的慢病毒载体

说明书

本发明公开了一种适用地中海贫血和镰刀型贫血基因治疗的慢病毒载体；该慢病毒载体包含beta珠蛋白表达盒，所述表达盒包含：微基因座控制区，为一段从beta珠蛋白16kb的基因座控制区中筛选出来的不含HS1区的微型调控元件；beta珠蛋白的基因序列；beta珠蛋白的基因序列上游侧翼的启动子序列；beta珠蛋白的基因序列下游的侧翼序列。与现有技术相比，本发明筛选出beta珠蛋白表达盒兼具效率与特异性，并且不会导致慢病毒滴度降低；筛选的一段来自泡沫病毒的仅36bp的绝缘子序列，不含有隐秘的RNA剪接信号，具有维持基因表达和防止所在区域基因激活的功能；本发明可以用于地中海贫血和镰刀型贫血的基因治疗。

技术领域

本发明属于医疗技术领域，具体涉及一种适用地中海贫血和镰刀型贫血基因治疗的慢病毒载体。

背景技术

迄今为止，人类共发现有7000余种罕见病，但仅5％的罕见病有药可用。目前，几乎所有的罕见病药物都需要终身使用。基因治疗则为罕见病提供了一次性治愈的可能。地中海贫血(地贫)是一种全球分布最广、累积患病人群最多的单基因遗传性血红蛋白病，是罕见病中最常见的人类遗传性疾病。

基因治疗的安全性是其能够成为常规疗法，使更多患者受益的前提。慢病毒载体以不可控的方式插入到基因组(约75％整合至转录活跃的基因编码区域)，伴随有较高的激活癌基因和失活抑癌基因的风险。事实上，慢病毒载体曾在基因治疗地中海贫血的过程中激活HMGA2基因，导致转导的造血干细胞克隆大量扩增。该克隆的异常扩增是由于慢病毒基因治疗载体中使用的绝缘子元件，也即鸡beta珠蛋白脱氧核糖核酸酶I超敏感部位4核心部位(core chicken hypersensitivity site 4，cHS4)造成的(Cavazzana-Calvo,M.etal.Transfusion independence and HMGA2 activation after gene therapy of humanbeta-thalassaemia.Nature 467,318-22(2010).)。

绝缘子元件是具有阻止基因沉默或者防止所在区域基因激活功能的基因元件。cHS4绝缘子含有隐秘的RNA剪接信号，造成克隆扩增，影响基因治疗的安全性，并且使得慢病毒的滴度大幅下降(Cavazzana-Calvo,M.et al.Transfusion independence and HMGA2activation after gene therapy of human beta-thalassaemia.Nature 467,318-22(2010).Negre,O.et al.Preclinical evaluation of efficacy and safety of animproved lentiviral vector for the treatment of beta-thalassemia and sicklecell disease.Curr Gene Ther 15,64-81(2015).)。本发明所包含的绝缘子元件来自泡沫病毒(Foamy virus)，仅36bp的绝缘子序列，不含有隐秘的RNA剪接信号，并具有维持基因表达和防止所在区域的癌基因激活的功能。