[发明专利]念珠菌检测设备及检测方法

权利要求书

1.一种念珠菌检测设备，其特征在于：包括离心机、聚合酶链式反应仪、磁共振检测系统、念珠菌磁性纳米探针、探针盛放装置和传送装置，全血试样由所述传送装置送至离心机旋转离心处理，再由传送装置送至聚合酶链式反应仪进行聚合酶链式反应，全血试样经过旋转离心处理和聚合酶链式反应后与所述念珠菌磁性纳米探针混合，之后由传送装置将混合液体送至磁共振检测系统进行T2弛豫时间测量，根据所述T2弛豫时间检测念珠菌是否存在，并确定念珠菌的种类。

2.如权利要求1所述的念珠菌检测设备，其特征在于：所述念珠菌磁性纳米探针包含具有缀合到磁性粒子表面的第一探针和第二探针，第一探针的作用是结合到靶核酸的第一区段，第二探针的作用是结合到靶核酸的第二区段，磁性粒子在靶核酸存在下形成聚集体，显著增大分析物的T2弛豫时间；所述磁共振检测系统使用在念珠菌与念珠菌磁性纳米探针结合之前的纳米粒子溶液来测量T2弛豫时间的基线值，然后对所述混合液体测量T2弛豫时间，以判断T2弛豫时间是否发生变化。

3.如权利要求2所述的念珠菌检测设备，其特征在于：在聚合酶链式反应正向引物和反向引物存在下对待检测的核酸进行扩增，寡核苷酸探针分别与聚合酶链式反应产物的5’和3’端的嵌套序列互补，杂交到扩增子的5’端的捕获探针被3’胺化，杂交到扩增子的3’端的捕获探针被5’胺化，所述正向引物包含寡核苷酸序列5’—GGC ATG CCT GTT TGA GCG TC—3’，所述反向引物包含寡核苷酸序列5’—GCT TAT TGA TAT GCT TAA CAG CGG GT—3’。

4.如权利要求3所述的念珠菌检测设备，其特征在于：所述念珠菌属物种是白色念珠菌，所述念珠菌磁性纳米探针的第一探针包含寡核苷酸序列ACC CAG CGG TTT GAG GGAGAA AC，所述念珠菌磁性纳米探针的第二探针包含寡核苷酸序列AAA GTT TGA AGA TATACG TGG TGG ACG TTA。

5.如权利要求3所述的念珠菌检测设备，其特征在于：所述念珠菌属物种是热带念珠菌，所述念珠菌磁性纳米探针的第一探针包含寡核苷酸序列AAA GTT ATG AAA TAA ATTGTG GTG GCC ACT AGC，所述念珠菌磁性纳米探针的第二探针包含寡核苷酸序列ACC CGGGGG TTT GAG GGA GAAA。

6.如权利要求3所述的念珠菌检测设备，其特征在于：所述念珠菌属物种是近平滑念珠菌，所述念珠菌磁性纳米探针的第一探针包含寡核苷酸序列AGT CCT ACC TGA TTT GAGGTC GAA，所述念珠菌磁性纳米探针的第二探针包含寡核苷酸序列CCG AGG GTT TGA GGGAGA AAT。

7.如权利要求1所述的念珠菌检测设备，其特征在于：所述全血试样上贴有二维码，所述念珠菌检测设备还包括二维码扫描模块，所述二维码扫描模块对所述全血试样进行二维码扫描，将该全血试样与二维码进行特定化设置和绑定。

8.如权利要求7所述的念珠菌检测设备，其特征在于：所述磁共振检测系统为小型自屏蔽永磁磁共振系统，不需要额外的磁场屏蔽。

9.如权利要求7所述的念珠菌检测设备，其特征在于：所述念珠菌检测设备还包括5G通信模块，念珠菌检测设备通过5G通信模块与实验室信息系统连接，检测结果通过5G通信模块实时传输至实验室信息系统。

10.一种念珠菌检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)扫描全血试样上标注的二维码；

2)在全血试样中添加一定量的低渗裂解液，并进行旋转离心，再除去上清液；

3)添加TE缓冲液和酸洗玻璃珠，在一定转速下涡旋一段时间以实现裂解；

4)取一定量裂解物加入聚合酶链式反应混合液，进行聚合酶链式反应；

5)取经过聚合酶链式反应的扩增试样，添加一定量的磁性纳米粒子混合液，孵育一段时间；

6)用磁共振检测系统测量步骤5)处理后的试样的T2弛豫时间；

念珠菌磁性纳米粒子平均直径为800nm，每个粒子的T2弛豫率为1010mM^-1s^-1，所述磁共振检测系统使用在念珠菌—纳米粒子探针结合之前的纳米粒子溶液来测量T2弛豫时间的基线值，然后将分析物与纳米粒子混合，再次测量样本的T2弛豫时间以确定T2弛豫时间是否发生变化，基线测量确保正确的纳米粒子浓度和一致的化学计量；与白色念珠菌、热带念珠菌和近平滑念珠菌相对应的磁性纳米探针T2弛豫时间的基线值分别为40ms、45ms和37ms，在检测灵敏度为3CFU/ml时，白色念珠菌、热带念珠菌和近平滑念珠菌与相应磁性纳米探针混合样本的T2弛豫时间分别为485ms、610ms和565ms。