[发明专利]用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物及其应用

权利要求书

1.一种用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物，其特征在于，包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQID NO.2所示。

2.权利要求1所述的引物在鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA；

2)分别以步骤1)中提取的丰宝茄子’杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA为模板，用权利要求1中所述的引物进行PCR扩增，获得杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定杂交种样品的扩增产物；

3)对步骤2)中获得的杂交种的父本、母本以及待鉴定杂交种样品的扩增产物进行电泳，若杂交种的父本扩增产物显示为一条带、杂交种的母本的扩增产物显示为一条带，待鉴定的杂交种样品的扩增产物显示为两条带，并且分别与杂交种的父本和杂交种母本的扩增产物显示的条带对应，则认为所述待鉴定的杂交种样品为纯杂交种；

4)用鉴定为纯杂交种的待鉴定杂交样品数量除以待鉴定杂交种样品的总数量获得杂交种子的纯度。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤1)中所述‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA的提取组织为幼苗子叶。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述基因组DNA的提取方法如下：分别将‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的幼苗子叶破碎后，固液分离，收集上清液即为基因组DNA。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述破碎为将所述幼苗子叶、研磨珠和1×TPS提取液混合后，以2500～3500rpm的转速涡旋震荡破碎。

7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述固液分离的方式为离心，所述离心的转速为11000～13000rpm，所述离心的时间为8～12min。

8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤2)中所述PCR扩增的体系，以10μL计，包括以下组分：

9.根据权利要求3或8所述的应用，其特征在于，步骤2)中所述PCR扩增的程序如下：

94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃保持7min。

10.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤3)中所述的电泳的电压为115～125V，所述电泳的时间为80～100min。