[发明专利]用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物及其应用

说明书

本发明提供了用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物及其应用，属于茄子种植技术领域，所述引物包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：1)提取‘丰宝’茄子杂交种的父本、母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA；2)以基因组DNA为模板，用所述的引物进行PCR扩增获得扩增产物；3)对扩增产物进行电泳，根据电泳条带确定所述待鉴定的杂交种样品是否为纯杂交种；4)用鉴定为纯杂交种的待鉴定杂交样品数量除以待鉴定杂交种样品的总数量获得杂交种子的纯度。本发明提供的应用，快速、准确。

技术领域

本发明属于茄子种植技术领域，尤其涉及用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物及其应用。

背景技术

茄子是亚洲、中欧、南欧和非洲重要的农作物，拥有极高的经济价值。目前，茄子制种主要采用去雄制种技术，如果去雄不彻底或开花去雄，都会导致生产上繁制的茄子种子纯度不合格，因此杂交种子在销售之前必须进行纯度鉴定。传统上杂交种纯度鉴定主要采用田间种植，不仅耗费大量时间，空间，人力，物力，鉴定技术还依靠个人的经验；费事费力还不准确。落后的杂交种子纯度鉴定方法在一定程度上影响了种子的销售速度。

现有的分子技术可以作为纯度鉴定的有SSR、SNP，InDel标记等，但是SNP，Indel标记都是基于双亲重测序的基础上，成本较高，不利于普通杂交种子的鉴定工作。

目前，对于‘丰宝’茄子杂交种子纯度的鉴定尚没有一种高效、准确的引物以及鉴定方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物及其应用；所述引物能够快速、准确地鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物，包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明提供了所述的引物在鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度中的应用。

所述的应用，优选的包括以下步骤：

1)提取‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA；

2)分别以步骤1)中提取的‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA为模板，用所述的引物进行PCR扩增，获得杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定杂交种样品的扩增产物；

3)对步骤2)中获得的杂交种的父本、母本以及待鉴定杂交种样品的扩增产物进行电泳，若杂交种的父本扩增产物显示为一条带、杂交种的母本的扩增产物显示为一条带，待鉴定的杂交种样品的扩增产物显示为两条带，并且分别与杂交种的父本和杂交种母本的扩增产物显示的条带对应，则认为所述待鉴定的杂交种样品为纯杂交种；

4)用鉴定为纯杂交种的待鉴定杂交样品数量除以待鉴定杂交种样品的总数量获得杂交种子的纯度。

优选的，步骤1)中所述‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA的提取组织为幼苗子叶。

优选的，所述基因组DNA的提取方法如下：分别将‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的幼苗子叶破碎后，固液分离，收集上清液即为基因组DNA。

优选的，所述破碎为将所述幼苗子叶、研磨珠和1×TPS提取液混合后，以2500～3500rpm的转速涡旋震荡破碎。

优选的，所述固液分离的方式为离心，所述离心的转速为11000～13000rpm，所述离心的时间为8～12min。