[发明专利]一种甲基化保护宿主菌及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 201910828288.4 | 申请日： | 2019-09-03 |
| 公开（公告）号： | CN110438102A | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | 程槐旭;刘杨;燕东平;聂尚海 | 申请（专利权）人： | 莫纳（武汉）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/70;C12N1/21;C12N9/16;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 430200 湖北省武汉市东湖开发区高新二路3*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甲基化 氨基酸序列 核苷酸序列 甲基转移酶 宿主菌 构建 宿主菌基因组DNA 限制性内切酶 宿主菌转化 表达载体 宿主DNA 应用 切割 | ||
1.一种甲基转移酶，其特征在于，所述甲基转移酶的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；
所述甲基转移酶的核苷酸序列包括如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。
2.一种甲基转移酶表达载体，其特征在于，包括如权利要求1所述的甲基转移酶的核苷酸序列。
3.一种甲基化保护宿主菌，其特征在于，所述甲基化保护宿主菌包括如权利要求2所述的甲基转移酶表达载体。
4.一种甲基化保护宿主菌的构建方法，其特征在于，所述方法包括：
构建如权利要求2所述的甲基转移酶表达载体，转化到宿主菌，抗性筛选后得到所述甲基化保护宿主菌。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：
(1)采用如SEQ ID NO:3-4所示的引物对，从菌株Microcystis aeruginosaNIES-2481的基因组中获得甲基转移酶M.Mae2481ORF83P基因；
(2)将M.Mae2481ORF83P基因插入pACYC184的NdeI和XhoI酶切位点，转化入大肠杆菌克隆菌株，氯霉素抗性筛选后提取质粒，得到甲基转移酶表达载体；
(3)将甲基转移酶表达载体转化入大肠杆菌表达菌株，氯霉素抗性筛选后得到所述甲基化保护宿主菌。
6.一种NdeI限制性内切酶的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
将包含NdeI核苷酸序列的重组质粒转化入如权利要求3所述的甲基化保护宿主菌，抗性筛选后得到重组菌株；诱导培养，得到所述NdeI限制性内切酶。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1’)采用如SEQ ID NO:5-6所示的引物对，从菌株Neisseria denitrificans的基因组中获得限制性内切酶NdeI基因；
(2’)将NdeI基因插入pBAD的NdeI和HindIII酶切位点，转化入大肠杆菌克隆菌株，氨苄青霉素抗性筛选后提取质粒，得到包含NdeI核苷酸序列的重组质粒；
(3’)将包含NdeI核苷酸序列的重组质粒转化入如权利要求3所述的甲基化保护宿主菌，氨苄青霉素和氯霉素抗性筛选后得到重组菌株；
(4’)对所述重组菌株进行阿拉伯糖诱导培养，得到所述NdeI限制性内切酶。
8.一种NdeI限制性内切酶，其特征在于，采用如权利要求6或7所述的方法制备得到。
9.根据权利要求8所述的NdeI限制性内切酶，其特征在于，所述NdeI限制性内切酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。
10.一种如权利要求1所述的甲基转移酶、如权利要求2所述的甲基转移酶表达载体、如权利要求3所述的甲基化保护宿主菌或如权利要求8或9所述的NdeI限制性内切酶在制备分子检测试剂盒中的应用。
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