[发明专利]抗VEGF单域抗体及其应用

说明书

本发明提供了抗VEGF单域抗体及其应用。具体地，本发明提供了一种抗VEGF单域抗体及其VHH链。本发明还提供了编码上述单域抗体或其VHH链的编码序列、相应的表达载体和能够表达该单域抗体的宿主细胞，以及本发明单域抗体的生产方法。本发明单域抗体能够特异性识别人VEGFA，不与VEGFB、VEGFC、VEGFD发生交叉反应，具有良好的特异性；本发明单域抗体能同时识别人、鼠、兔、猴子的VEGFA，能够有效阻断VEGFA与VEGFR2、VEGFA与VEGFR1的相互作用；且对新生血管生成有极好的抑制作用。本发明单域抗体生成简便。

技术领域

本发明涉及生物医学或生物制药技术领域，更具体地涉及一种抗VEGF单域抗体及其应用。

背景技术

现有的血管内皮生长因子药物包括贝伐珠单抗(Bevacizumab，商品名为Avastin)、康柏西普(Conbercept)、阿柏西普(Aflibercept)等。2018年2月13日，国家食品药品监督管理总局(CFDA)已批准艾力雅(阿柏西普眼内注射溶液)用于治疗成人糖尿病性黄斑水肿。用于抗肿瘤治疗的贝伐珠单抗(Bevacizumab，商品名为Avastin)的价格是1998元每瓶4ml(含100mg贝伐珠单抗)，推荐剂量是5mg/kg，每14天给药1次，假如一位患者的体重为60kg，每次应用300mg贝伐珠单抗，也就是三瓶，一个月用药2次，也就是11988元一个月。用于眼科疾病治疗的康柏西普的价格是5550元每支0.2ml(含10mg康柏西普)，它的给药方案是前三月每月注射一次，后续三月注射一次，一年共6次，也就是33300元一年。此外，阿柏西普的价格是5850元每瓶0.1ml(含4mg阿柏西普)，它的给药方案是每两个月给药1次，一年共6次，也就是35100元一年。

单域抗体(nanobody，Nb)，即重链单域抗体VHH(variable domain of heavychain of heavy-chain antibody)—骆驼体内存在着天然缺失轻链的重链抗体(heavy-chain antibody，HCAb)，克隆其可变区而得到的只由一个重链可变区组成的单域抗体，是目前可以得到的具有完整功能的稳定的可结合抗原的最小单位。单域抗体具有稳定性高、水溶性好、人源化简单、靶向性高、穿透性强等特点，在免疫实验、诊断与治疗中，发挥着超乎想象的巨大功能。单域抗体正逐渐成为新一代抗体诊断及治疗中的新兴力量。

开发一种新型抗VEGF单域抗体，使其具有较好的特异性、阻断活性，更佳的临床药效，并且生产简便，能够降低生产成本，减轻患者用药负担，已经成为亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型抗VEGF单域抗体及其应用。

具体地，本发明的目的在于提供一种能够有效阻断VEGFA与VEGFR2、VEGFA与VEGFR1的相互作用、对新生血管生成有良好的抑制作用，对实体瘤具有良好的抑制作用，且具有较好的特异性的单域抗体。

本发明的第一方面，提供了一种抗VEGF单域抗体单域抗体VHH链的互补决定区CDR区，所述VHH链的互补决定区CDR包括SEQ ID NO.:1所示的CDR1、SEQ ID NO.:2所示的CDR2、和SEQ ID NO.:3所示的CDR3。

在另一优选例中，所述的CDR1、CDR2和CDR3被框架区FR1、FR2、FR3和FR4所隔开。

本发明的第二方面，提供了一种抗VEGF单域抗体的VHH链，所述的VHH链包括框架区FR和本发明的第一方面所述的互补决定区CDR。

在另一优选例中，所述的框架区FR包括：

(a)SEQ ID NO.:4所示的FR1、SEQ ID NO.:5所示的FR2、SEQ ID NO.:6所示的FR3、和SEQ ID NO.:7所示的FR4；或