[发明专利]一种水蛭素编码基因及包含该基因的宿主系统在审
| 申请号： | 201910832553.6 | 申请日： | 2019-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN110484541A | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 石萍;鲁增辉;游华建;陈仕江 | 申请（专利权）人： | 重庆市中药研究院 |
| 主分类号： | C12N15/15 | 分类号： | C12N15/15;C12N15/10;C12N15/81;C12N1/19;C07K14/815;C12R1/84 |
| 代理公司： | 51229 成都正华专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 肖芳<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 400065*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 编码基因 表达载体 宿主细胞 水蛭素 氨基酸序列 核苷酸序列 唾液腺组织 日本医蛭 宿主系统 用药需求 有效解决 资源限制 基因 生物量 多肽 水蛭 蛋白 转化 生产 | ||
1.一种水蛭素编码基因，其特征在于：所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。
2.如权利要求1所述的水蛭素编码基因的获取方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：取日本医蛭，挑取其唾液腺组织；
S2：提取唾液腺组织中的RNA；
S3：根据提取的RNA进行cDNA第一链的合成，并据此进行PCR扩增得核心序列，核心序列如SEQ ID NO.3所示；
S4：对cDNA进行5’RACE和3’RACE，并分别测序，测序结果如SEQ ID NO.7和SEQ IDNO.10所示；
S5：将核心序列以及S4中所得序列拼接，获得水蛭素编码基因。
3.根据权利要求2所述的水蛭素编码基因的获取方法，其特征在于，S3中cDNA第一链的合成包括如下步骤：
(1)将RNA与浓度为100uM的oligo引物按1:1μg/μL的料液比混合；
(2)将上述混合物于65℃下放置5min，再冰上冷却1min；然后向混合物中加入5Xreaction buffer、RiboLock RNase Inhibitor、dNTP mix和RevertAid M-MuLV ReverseTranscriptase，随后离心；
(3)将离心后的混合液置于PCR仪上，42℃孵育1h；然后在70℃下赋予5min，完成cDNA第一链的合成。
4.根据权利要求2所述的水蛭素编码基因的获取方法，其特征在于，S3中PCR扩增体系为：
其中，primer F和primer R分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
5.含有权利要求1所述编码基因的重组质粒。
6.根据权利要求5所述的重组质粒，其特征在于：所述重组质粒的表达载体为毕赤酵母pPIC9K。
7.一种宿主系统，其特征在于：所述宿主系统由权利要求5所述的重组质粒转化真核宿主细胞得到。
8.根据权利要求7所述的宿主系统，其特征在于：所述真核宿主为毕赤酵母GS115。
9.如权利要求7所述的宿主系统在制备水蛭素中的应用。
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