[发明专利]同时定量检测食用油中黄曲霉毒素总量、玉米赤霉烯酮的嵌合ELISA试剂盒

权利要求书

1.一种同时定量检测食用油中黄曲霉毒素总量、玉米赤霉烯酮的嵌合ELISA试剂盒，其特征在于，所述嵌合ELISA试剂盒包括偶联黄曲霉毒素总量全抗原和偶联玉米赤霉烯酮全抗原、黄曲霉毒素总量单克隆抗体、玉米赤霉烯酮单克隆抗体、基准液、同时包被所述黄曲霉毒素总量全抗原和玉米赤霉烯酮全抗原的酶标板以及用于ELISA实验的显色液、终止液和稀释液；所述基准液用于作为空白对照组的溶液；

测定待测样品时，同时检测加入基准液的空白对照组和加入待测样品组的OD值，通过所述OD值计算得到所述待测样品的浓度；

所述黄曲霉毒素总量单克隆抗体是通过黄曲霉毒素总量AFT细胞株4E9株制备得到的，所述黄曲霉毒素总量AFT细胞株4E9株已于2019年4月28日保藏于位于中国武汉武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C201991；

所述玉米赤霉烯酮单克隆抗体是通过ZEN 6G1细胞株制备得到的，所述ZEN 6G1细胞株已于2019年7月4日保藏于位于中国武汉武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2019153；

所述基准液为硼酸、氢氧化钠、色氨酸和乙二胺四乙酸的水溶液。

2.如权利要求1所述的同时定量检测食用油中黄曲霉毒素总量、玉米赤霉烯酮的嵌合ELISA试剂盒，其特征在于，

储存有预先建立的用于计算待测样本中黄曲霉毒素总量和玉米赤霉烯酮含量的标准曲线的数据处理装置。

3.如权利要求2所述的同时定量检测食用油中黄曲霉毒素总量、玉米赤霉烯酮的嵌合ELISA试剂盒，其特征在于，

所述标准曲线建立包括：利用标准品稀释液配成不同质量浓度的黄曲霉毒素总量溶液，用缓冲液稀释的黄曲霉毒素总量单克隆抗体，用缓冲液稀释的酶标物，进行间接ELISA测定，计算各浓度黄曲霉毒素总量的吸光度值，并以各浓度黄曲霉毒素总量的吸光度值的结合率为纵坐标、黄曲霉毒素总量标准物质浓度为横坐标，建立IC₅₀最低的黄曲霉毒素总量抑制标准曲线；

和/或者所述标准曲线建立包括：利用标准品稀释液配成不同质量浓度的玉米赤霉烯酮溶液，用缓冲液稀释的玉米赤霉烯酮单克隆抗体，用缓冲液稀释的酶标物，进行间接ELISA测定，计算各浓度玉米赤霉烯酮的吸光度值，并以各浓度玉米赤霉烯酮的吸光度值的结合率为纵坐标、玉米赤霉烯酮的浓度为横坐标，建立IC₅₀最低的玉米赤霉烯酮抑制标准曲线。

4.如权利要求1所述的同时定量检测食用油中黄曲霉毒素总量、玉米赤霉烯酮的嵌合ELISA试剂盒，其特征在于，

所述试剂盒还包括酶标液，所述酶标液为羊抗鼠IgG-HRP溶液。

5.一种制备权利要求1所述的同时定量检测食用油中黄曲霉毒素总量、玉米赤霉烯酮的嵌合ELISA试剂盒的方法，其特征在于包括制备基准液、黄曲霉毒素总量单克隆抗体、玉米赤霉烯酮单克隆抗体，配制用于ELISA实验的显色液、终止液和稀释液以及将偶联黄曲霉毒素总量全抗原和偶联玉米赤霉烯酮全抗原包被于同一酶标板上的过程；

所述黄曲霉毒素总量单克隆抗体是通过黄曲霉毒素总量AFT细胞株4E9株制备得到的，所述黄曲霉毒素总量AFT细胞株4E9株已于2019年4月28日保藏于位于中国武汉武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C201991；

所述玉米赤霉烯酮单克隆抗体是通过ZEN 6G1细胞株制备得到的，所述ZEN 6G1细胞株已于2019年7月4日保藏于位于中国武汉武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2019153。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，

所述基准液为硼酸、氢氧化钠、色氨酸和乙二胺四乙酸的水溶液。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于还包括：

预先建立用于计算待测样本中黄曲霉毒素总量或玉米赤霉烯酮含量的标准曲线，

所述黄曲霉毒素总量标准曲线建立包括：利用标准品稀释液配成不同质量浓度的黄曲霉毒素总量溶液，用缓冲液稀释的黄曲霉毒素总量单克隆抗体，用缓冲液稀释的酶标物，进行间接ELISA测定，计算各浓度黄曲霉毒素总量的吸光度值，并以各浓度黄曲霉毒素总量的吸光度值的结合率为纵坐标、黄曲霉毒素总量标准物质浓度为横坐标，建立IC₅₀最低的黄曲霉毒素总量抑制标准曲线；

和/或者所述标准曲线建立包括：利用标准品稀释液配成不同质量浓度的玉米赤霉烯酮溶液，用缓冲液稀释的玉米赤霉烯酮单克隆抗体，用缓冲液稀释的酶标物，进行间接ELISA测定，计算各浓度玉米赤霉烯酮的吸光度值，并以各浓度玉米赤霉烯酮的吸光度值的结合率为纵坐标、玉米赤霉烯酮的浓度为横坐标，建立IC₅₀最低的玉米赤霉烯酮抑制标准曲线。