[发明专利]血清中L-精氨酸的测定方法在审
| 申请号： | 201910836357.6 | 申请日： | 2019-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN110511976A | 公开（公告）日： | 2019-11-29 |
| 发明（设计）人： | 张超;刘冰;李立和 | 申请（专利权）人： | 天津市宝坻区人民医院 |
| 主分类号： | C12Q1/58 | 分类号： | C12Q1/58;C12Q1/34;C12Q1/32 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 301800*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 氧化型 尿素 精氨酸 血清 谷氨酸 温浴 精氨酸水解 可见光 测试材料 测试反应 结果颜色 精氨酸酶 色原物质 内源性 鸟氨酸 波长 检测 | ||
1.一种血清中L-精氨酸的测定方法，其特征在于试剂Ⅰ中含有α-酮戊二酸、NADPH、谷氨酸脱氢酶、尿素酶等主要成分及适量防腐剂；试剂Ⅱ内仅含有L-精氨酸酶及适量防腐剂；其测定方法为：血清先与试剂Ⅰ于37℃温浴3～5分钟，血清中尿素与试剂Ⅰ反应生成谷氨酸和氧化型NADP+，加入试剂Ⅱ后于37℃温浴4～7分钟，L-精氨酸水解后生成L-鸟氨酸和尿素，尿素经反应生成谷氨酸和氧化型NADP+，仪器在334nm～340nm波长处检测，以试剂Ⅰ反应产生的氧化型NADP+为空白，由试剂Ⅱ反应产生的氧化型NADP+计算出L-精氨酸的含量，计算公式为：ODL-精氨酸 = OD2 -OD1×[SV+R1V1）/(SV+R1V1 +R2V2)]
L-精氨酸浓度= F×ODL-精氨酸，其中ODL-精氨酸 是L-精氨酸产生的吸光度，OD1是样品加入试剂Ⅰ反应后测得的吸光度，OD2是加入试剂Ⅱ反应后测得的吸光度，SV是血清的体积，R1V1是试剂Ⅰ的体积，R2V2是试剂Ⅱ的体积，F是校正因数。
2.根据权利要求1所述的血清中L-精氨酸的测定方法，其特征在于试剂Ⅰ中含有α-酮戊二酸、NADPH、谷氨酸脱氢酶、尿素酶等主要成分及适量防腐剂；试剂Ⅱ内仅含有L-精氨酸酶及适量防腐剂。
3.根据权利要求1所述的血清中L-精氨酸的测定方法，其特征在于试剂Ⅰ及试剂Ⅱ中防腐剂选自Proclin-300。
4.根据权利要求1所述的血清中L-精氨酸的测定方法，其特征在于试剂Ⅰ每升50mmolTris-HCl缓冲液中溶解α-酮戊二酸10.0～20.0mmol、NADPH 0.40～0.60mmol、谷氨酸脱氢酶4000～6000U、尿素酶1000U～2000U、Proclin-300 100µl～300µl；试剂Ⅱ每升50mmolTris-HCl缓冲液中溶解L-精氨酸酶2000U～2400U、Proclin-300 100µl～300µl。
5.根据权利要求4所述的血清中L-精氨酸的测定方法，其特征在于试剂Ⅰ和试剂Ⅱ中Tris-HCl缓冲液的pH值为7.8±0.2（25℃）。
6.根据权利要求4所述的血清中L-精氨酸的测定方法，其特征在于测定所用各物品的体积比为：样品∶试剂I∶试剂II=1∶100～140∶30～50。
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