[发明专利]血清中L-精氨酸的测定方法

说明书

本发明公开了一种血清中L‑精氨酸的测定方法，属于利用可见光，通过测试反应结果颜色的变化来测试材料的方法。本发明的技术方案是：试剂II中仅有精氨酸酶有效组分，色原物质及其它有效组分同在试剂I中，血清先与试剂Ⅰ于37℃温浴3～5分钟，血清中尿素与试剂Ⅰ反应生成谷氨酸和氧化型NADP⁺，加入试剂Ⅱ后于37℃温浴4～7分钟，L‑精氨酸水解生成L‑鸟氨酸和尿素，尿素经反应生成谷氨酸和氧化型NADP⁺，仪器在334nm～340nm波长处检测，以试剂Ⅰ反应产生的氧化型NADP⁺为空白，由试剂Ⅱ反应产生的氧化型NADP⁺，计算出L‑精氨酸的含量，本发明不受内源性尿素影响，是一种准确性更高的L‑精氨酸检测方法。

技术领域

本发明属于一种包含酶的测定方法；或是利用可见光，通过测试反应的结果产生颜色变化来测试材料的方法，特别是涉及一种用生化分析仪快捷、准确检测血清中L-精氨酸的测定方法。

背景技术

血清中氨基酸测定方法很多，常用的有：1.分光光度法物质对光的选择性吸收只有芳香族氨基酸在紫外区有吸收，通常利用氨基酸与衍生剂反应生成有色物质，常用的衍生化试剂如茚三酮，乙酰丙酮－甲醛等；2.气象色谱法将氨基酸衍生为易气化的物质，利用气态试样中各组分在两相间的分配系数不同进行分析，不能用一根色谱柱实现全氨基酸测定，应用不广泛，气质联用除了可以测定浓度外还可以发现新的氨基酸；3.液相色谱法各组分在两相间分配系数不同，经过反复的吸附－解吸附过程对其进行分离检测；A、紫外可见光检测器；B、荧光检测器；C、质谱检测器；D、积分脉冲安培检测技术；E、蒸发发散射检测技术；4.毛细管电泳法高压电场的驱动下据各组分间分配行为上的差异实现分离，具进样少、绝对灵敏度及分辨率高，无须梯度洗脱，分析速度快；5.近红外光谱法用统计学方法在样品待测属性值与近红外光谱数据间建立一个关联模型而间接对待测物质进行定量分析；6.化学发光法通过分子从激发态返回基态时发出的光信号间接对氨基酸进行分析，具有灵敏度高、线性范围宽、仪器设备简单等优点；7.生化酶法是以日本东洋纺试剂为代表，测定原理为L-精氨酸酶分解L-精氨酸为L-鸟氨酸和尿素，尿素在尿素酶的催化下生成氨和二氧化碳，氨、NADPH和α-酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶的作用下生成谷氨酸、水、NADP⁺，根据生成的NADP⁺量计算出L-精氨酸的含量。

反应公式为：

(1)精氨酸酶

L-精氨酸＋H₂OL-鸟氨酸＋尿素

(2)尿素酶

尿素＋H₂ONH₃＋CO₂

(3)GLDH

NH₃＋α-酮戊二酸＋NADPH谷氨酸＋H₂O+NADP⁺

但在本方法测定中，通过生成尿素的含量来反映出L-精氨酸的含量，既包含了血清中内源性尿素，也包含了L-精氨酸分解产生的尿素，因此，此方法测定结果出现较大偏差。

发明内容：

为了能简单、方便、快捷及准确地测定血清中L-精氨酸，本发明提供一种经济方便易行，准确性高、不受内源性尿素影响的血清中L-精氨酸的测定方法。