[发明专利]一种用于DNA大量提取的水稻叶片的制备方法

说明书

本发明公开了一种用于DNA大量提取的水稻叶片的制备方法，具体涉及水稻叶片DNA提取技术领域，制备方法流程如下：S1、水稻叶片装入2mL离心管；S2、将装有叶片的2mL离心管置于干燥箱中烘干；S3、从干燥箱中取出离心管，用塑料研磨棒进行研磨。本发明简化了操作程序，提高了工作效率，且避免受冻及易被冻伤事件的发生，适合长时间作业，可随时使用，避免了液氮法需购置液氮及其特殊保存等复杂环节，其在提取规模上具有较强的广泛性和实用性，既适合少量操作，也适用于大批量进行，另外避免了液氮法中液氮的使用费用高、操作繁琐等弊端，同时烘干法对叶片的干燥均匀充分，较液氮法更易于研磨粉细，更有利于DNA的浸出。

技术领域

本发明涉及水稻叶片DNA提取技术领域，更具体地说，本发明涉及一种用于DNA大量提取的水稻叶片的制备方法。

背景技术

水稻是我国最重要的粮食作物之一，其栽种面积约占粮食作物总面积的1/3，产量也约占粮食产量的一半，为中国60％以上的人口提供口粮，水稻的研究工作对我国的粮食生产及安全有着极为重要的意义，随着现代分子生物学的发展，分子技术早已成为水稻研究的重要手段，以DNA作为研究对象最为广泛，如基于DNA的基因定位、基因克隆及各种分子标记的开发与应用等，涉及水稻DNA的提取方法，数量颇多，较早的主要是传统的CTAB法和SDS法，随着专家学者的不断探索实践，以上两种又各自衍生出了一些新的提取方法，甚至脱离了传统CTAB及SDS方法的束缚，发展了全新的提取方法，如TE煮沸法、NaOH法、TPS法和PCR缓冲法等等，水稻的DNA提取方法不计其数，但是，无论哪种提取方法，从操作程序步骤上来论，都可简要地概括为两大部分，一是材料(如叶片、种子等)的制备，二是提取试剂的加入。

叶片是水稻最常用、最易于进行DNA的提取器官，叶片的磨细制备工艺，目前主要有液氮冷冻后研磨、无需冷冻直接研钵研磨及真空冷冻干燥后研磨等三种，其中，无需冷冻直接研钵研磨操作繁琐，费工费时，效率低下，少有使用，干燥冷冻法仪器昂贵，一些实验室根本不具备使用条件，且其干燥冷冻效果也不太令人满意，以上三种以液氮冷冻方法综合效果为佳，也较为实用和常用，利用液氨冷冻叶片，可使叶片受冻变脆利于研磨，同时在低温条件下也更利于组织细胞保护，然而，在实际工作中，使用液氮处理叶片，也表现出一些不便：(1)在液氮冷冻叶片之前，需将叶片的附着水进行擦干去除，以免叶片冷冻不充分，影响后续研磨效果，无疑这一操作步骤，也制约着工作效率的提高；(2)在常压下，液氮温度为-196℃，稍有不慎易被冻伤，且由于温度极低，不宜长时间接触；(3)为操作方便，使用过程基本置于无封闭的容器环境中，而液氮极易挥发，有效利用率低，在常规条件下也不易储存；(4)样品需浸没在液氮中受冻，使用量大，成本较高，甚至某些地方使用者附近无液氮销售，更是增加了使用困难，鉴于以上液氮使用存在的一些不足，故需要开发一种用于DNA大量提取的水稻叶片的制备方法。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺陷，本发明的实施例提供一种用于DNA大量提取的水稻叶片的制备方法，通过避免使用液氮法还需将叶片附着水去除以便解决冷冻充分及后续良好研磨效果，简化了操作程序，提高了工作效率，且避免受冻及易被冻伤事件的发生，适合长时间作业，可随时使用，避免了液氮法需购置液氮及其特殊保存等复杂环节，其在提取规模上具有较强的广泛性和实用性，既适合少量操作，也适用于大批量进行，另外所需设备简单易得，避免了液氮法中液氮的使用费用高、操作繁琐等弊端，同时通过烘干法对叶片的干燥均匀充分，较液氮法更易于研磨粉细，更有利于DNA的浸出。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于DNA大量提取的水稻叶片的制备方法，具体制备方法流程如下：

S1、水稻叶片装入2mL离心管；

S2、装有叶片的2mL离心管置于干燥箱中烘干；

S3、从干燥箱中取出离心管，用塑料研磨棒进行研磨。

在一个优选的实施方式中，在步骤S1中的水稻叶片为新鲜叶片，用量为0.3-0.4g。