[发明专利]一种微生物发酵提取杨梅素的方法

说明书

本发明属于天然产物分离技术领域，涉及一种微生物发酵提取杨梅素的方法。所述方法包括以下步骤：1)制备含有黑曲霉孢子悬浮液和乳酸杆菌悬浮液的共固定化凝胶珠；2)将杨梅素提取原料捣碎，加乙醇回流提取1‑5次，滤液合并并浓缩，滤渣干燥；3)向发酵罐中加水并加入步骤1)中的共固定化凝胶珠、步骤2)中的提取物以及1/5‑4/5干燥滤渣，40‑50℃下发酵提取140‑170h；4)发酵结束后，用筛网过滤发酵液，除去共固定化凝胶珠；5)过滤后的发酵液用乙醇回流提取1‑5次，合并滤液浓缩，得沉淀物；6)沉淀物反复水洗4～6次，得成品。该提取方法大大提高杨梅素收率和纯度，并且绿色环保安全。

技术领域

本发明属于天然产物分离技术领域，涉及一种微生物发酵提取杨梅素的方法。

背景技术

杨梅素[3，5，7-三羟基-2-(3，4，5-三羟基苯基)-4H-1-苯并呋喃-4-酮，Myricetin]又名杨梅树皮素、杨梅黄酮、杨梅酮、杨梅黄素，是一种多羟基黄酮醇化合物，黄色针状结晶，熔点为324.0～325.5℃，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于水，难溶于氯仿、石油醚。现代药理学研究表明，杨梅素具有抗炎镇痛、抗肿瘤、降血糖、保肝和抗氧化等多种药理活性，尤其在防治心血管疾病方面作用明显。鉴于其优异的抗氧化功能及降低胆固醇等作用，从植物中提取杨梅素已成为研究热点。

杨梅素广泛分布于杨梅科、葡萄科、豆科、杜鹃花科和大戟科等多科植物中，而其中以杨梅科和葡萄科植物为代表植物。我国的杨梅资源非常丰富，其中非果部位(枝、叶、皮)目前几乎处于闲置和荒废状态，从杨梅植物非果部分中提取杨梅素，对这些非果部分进行有效利用具有良好的生态及经济价值。

杨梅素存在于细胞内含物中，提取方法一般是利用酒精良好的穿透性，将其溶出细胞外。如邓丹雯等人(邓丹雯，杨佩，吕建壵，等.杨梅素提取工艺优化[J].食品与发酵工业，2013(3))研究的利用乙醇从杨梅枝中提取杨梅素的工艺，最佳提取工艺为提取温度84.86℃、乙醇体积分数82.09％、液料比为12.82∶1、提取时间1.5h，在此条件下，杨梅素的提取得率依旧非常低，仅为1.355％。这是因为杨梅枝等植物中存在大量的纤维，细胞壁也是由木质素、纤维素及果胶等成分构成，它们都会影响杨梅素的溶出率，进而降低杨梅素的提取效率；而且杨梅素多以杨梅苷的形式存在于天然植物中，单纯的乙醇提取，并不能将植物中杨梅苷转换为杨梅素，故而杨梅素提取率低。中国专利申请(公开号CN107721963A)公开了一种从杨梅树皮中提取分离杨梅素的方法，利用盐酸、硫酸或者硝酸将提取到的杨梅苷加热水解脱苷形成杨梅素，从而提高最终杨梅素的得率。但是这些强酸都是易污染环境的工业原料，安全性也不高，而且强酸水解杨梅苷后的残留物质很难去除，降低杨梅素纯度。

发明内容

本发明针对现有技术中杨梅素提取工艺的不足，采用微生物发酵提取法代替传统的硫酸或盐酸提取法，提高杨梅素的提取得率和纯度，且提取方法绿色环保无污染。

本发明的一个目的通过以下技术方案来实现：

一种微生物发酵提取杨梅素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)制备共固定化凝胶珠：将黑曲霉孢子悬浮液和乳酸杆菌悬浮液混合后，加入至海藻酸钠溶液中，采用注射剂将形成的混合液滴入至CaCl₂溶液中，形成共固定化凝胶珠；

2)将杨梅素提取原料捣碎，加乙醇回流提取1-5次，合并滤液加压浓缩或者减压浓缩除去乙醇，得到提取物，滤渣干燥；

3)向发酵罐中加水并加入步骤1)中的共固定化凝胶珠、步骤2)中的提取物以及1/5-4/5干燥滤渣，40-50℃下发酵提取140-170h；

4)发酵结束后，用筛网过滤发酵液，除去共固定化凝胶珠；

5)过滤后的发酵液用乙醇回流提取1-5次，合并滤液减压浓缩除去乙醇，得沉淀物；

6)沉淀物反复水洗4～6次，得成品。