[发明专利]一种紫草液相分离时色谱峰的质量的定量分析方法

说明书

本发明涉及新疆紫草在液相分离时各个色谱峰的相对定量的液相色谱‑电喷雾检测器(HPLC‑CAD)定量分析方法。本发明步骤为：1)以已知化合物溶液为定量参比，所述已知化合物溶液为β,β‑二甲基丙烯酰紫草素的甲醇溶液；分别以log(质量)与其log(CAD峰面积)为横纵坐标，建立参比化合物log(质量)与其log(CAD峰面积)的关系图，采用加权1/X²最小二乘法进行回归计算，求得它们的线性回归方程与相关系数；其中，X为参比log样品质量；2)再对待测紫草样品溶液采用电喷雾检测器(CAD)的反相高效液相色谱法进行检测，并根据检测的CAD色谱峰面积结果代入上述方程中计算待测紫草样本液相分离时各个色谱峰的质量。本发明的定量分析方法可靠，简单高效，灵敏度，准确度高。

技术领域

本发明涉及一种相对定量分析方法，尤其涉及新疆紫草乙醇提取物的石油醚萃取样品液相分离时各个色谱峰的相对定量；属于中草药分析技术领域。

背景技术

新疆紫草为紫草科软紫草属植物。作为传统的中药，新疆紫草具有多种生物活性，如抑菌、伤口愈合、抗炎、抗肿瘤等。新疆紫草中的主要成为为萘醌类成分，如紫草素、乙酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素等。

关于紫草的成分含量定量测定方法文献主要有：孙健文等采用反相高效液相色谱法法同时测定新疆紫草中紫草素、乙酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素的含量(中国药房,2018,29(04):455-457.)。澜兰·艾则孜等建立了高效液相色欧阳测定紫草中左旋紫草素含量的方法(新疆中医药,2014,32(06):47-49.)等。目前对紫草类药材的定量测定，多数是对单一或者多个萘醌类成分的同时测定，检测器多数用的是紫外检测器。也有一些研究采用了不同于紫外的检测方法进行定性定量分析，例如，Liao等采用高效液相色谱-飞行时间质谱法同时测定了紫草(包括新疆紫草，硬紫草和内蒙紫草)中9个萘醌类和4个呋喃类化合物(Chin Pharm J(中国药学杂志),2016,51:1212-1218.J Chromatogr A,2015,1425:158-172.)。Tao等利用高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)法测定了紫草中紫草素、乙酰紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素的含量(J Yangzhou U(NatSci Ed)(扬州大学学报·自然科学版),2017,20:33-37.)。而本发明采用了一种电喷雾检测器(CAD)进行定量分析，针对复杂的新疆紫草样品，做到各个成分的定量。CAD属于通用型检测器，是一种新型原理的、高灵敏度、重现性较好的检测器，它基于雾化检测器的原理，洗脱液经雾化后形成颗粒，经过漂移管干燥后与带电氮气碰撞，使得目标化合物带上正电荷，最后，通过静电计测量电荷的量，该测量值与目标化合物的质量成一定比例关系。它的检测技术完全不依赖于化合物的分子结构，达到了通用性目的，能对大多数化合物提供一致响应性，同时能达到较高的灵敏度和低检测极限，很容易检测到纳克数量级的化合物，并且与液相色谱分离系统联用，其重现性、稳定性很好，因此能准确的用于定量分析或半定量分析。

发明内容

本发明提供了一种同时检测新疆紫草中多种化学成分的相对定量分析方法，该方法完善了新疆紫草定量评价体系，采用的流动相系统比较简单，结果方法快速、准确,重现性好，检测周期短，且仅使用一种对照品即可达到准确定量，因此可解决对照品数量不足的情况下对于新疆紫草的定量分析。

为了实现上述技术，本发明提供了一种新疆紫草的液相色谱-电喷雾检测器(HPLC-CAD)串联的定量分析方法，其包括以下步骤，：以β,β-二甲基丙烯酰紫草素甲醇溶液为参比溶液，以新疆紫草的石油醚萃取物甲醇溶液为待测溶液，采用液相色谱-电喷雾检测器检测，根据检测结果计算待测溶液中多个成分的含量。

优选的方案，所述的待测溶液的制备方法为：826g新疆紫草药材粉碎后过2号筛，经70％-95％乙醇常温下冷浸萃取72小时，收集滤液，滤渣用同样的方法再冷浸萃取2次，每次72小时，收集并合并滤液在50-55℃下减压旋蒸干燥，干燥后样品再用石油醚萃取，收集石油醚层液体，30-40℃下减压旋蒸干后，取14mg石油醚层干燥后的样品复溶于1mL甲醇中得到的样品。