[发明专利]与中国家马矮小性状相关的SNP标记及其应用

权利要求书

1.一种特异性引物组合或含有该特异性引物组合的试剂盒或试剂在鉴定矮小中国家马品种中的应用；所述特异性引物组合包括：

引物1:CCGAGTCTGGGAGGTCAGTCG；

引物2CCGAGTCTGGGAGGTCAGTCA；

引物3:GTCTGCAAACTTCCGCCAATTA。

2.一种特异性引物组合或含有该特异性引物组合的试剂盒或试剂在中国家马分子标记辅助育种中的应用；所述特异性引物组合包括：

引物1:CCGAGTCTGGGAGGTCAGTCG；

引物2CCGAGTCTGGGAGGTCAGTCA；

引物3:GTCTGCAAACTTCCGCCAATTA。

3.一种特异性引物组合或含有该特异性引物组合的试剂盒或试剂在中国家马种质资源改良中的应用；所述特异性引物组合包括：

引物1:CCGAGTCTGGGAGGTCAGTCG；

引物2CCGAGTCTGGGAGGTCAGTCA；

引物3:GTCTGCAAACTTCCGCCAATTA。

4.一种鉴定具有矮小性状中国家马的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测马匹的基因组DNA；

2)以待测马匹的基因组DNA为模板，利用特异性引物进行PCR扩增反应，获得扩增产物片段；

3)检测PCR扩增产物片段的第501bp处的碱基种类，若碱基种类为A，则判定待测马匹具有矮小性状，若碱基种类为G，则判定待测马匹具有高大性状；即在检测中有引物1标记基团荧光的个体基因型为AA，有引物2标记基团荧光的个体基因型为GG；

其中，所述特异性引物包括：

引物1:CCGAGTCTGGGAGGTCAGTCG,

引物2:CCGAGTCTGGGAGGTCAGTCA，

引物3:GTCTGCAAACTTCCGCCAATTA；引物1和引物2标记不同颜色的荧光基团。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2)中PCR反应使用的扩增体系以5μl计为：50-100ng/μl模板DNA 2.43μl，KASP Master Mix 2.5μl，KASP Assay Mix 0.07μl。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2)中PCR反应的条件为：第一步:94℃,15min；第二步:94℃,20s,61～55℃,1min,每个循环降低0.6℃,共进行10个循环；第三步:94℃,20s,55℃,1min,共进行26个循环。