[发明专利]用于乳腺癌的早期筛查、诊断、疗效监测和/或预后评价的检测引物组合及试剂盒

说明书

本发明提供一种用于乳腺癌的早期筛查、诊断、疗效监测和/或预后评价的RNA hsa‑miR‑141‑3p检测引物组合，包括逆转录引物和PCR引物，逆转录引物的碱基序列如SEQ ID No.2所示。可使逆转录后的hsa‑miR‑141‑3p序列延长。还提供了用于乳腺癌的早期筛查、诊断、疗效监测和/或预后评价的RNA hsa‑miR‑141‑3p检测试剂盒，检测结果准确可靠，操作简便，适于推广应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及用于乳腺癌的早期筛查、诊断、疗效监测和/或预后评价的RNA hsa-miR-141-3p检测引物组合及试剂盒。

背景技术

微小RNA(microRNA，miRNA)是大小为18～25个核苷酸的内源性小分子RNA。成熟的miRNA通过与靶基因mRNA3’非编码区结合，介导mRNA降解或抑制表达翻译，因此miRNA在疾病发生发展中具有重要的研究价值。但是成熟miRNA由于核酸序列短，无法采用常规的PCR或荧光定量PCR方法进行基因表达的分析，因此需要设计特殊的引物。

2005年，chen等(Chen C,2005,Nucleic Acids Res,33,e179)设计出一种茎环结构的逆转录引物，使成熟的miRNA逆转录后序列延长，方便 miRNA的基因表达分析。随后很多miRNA的研究基于这种思路设计逆转录引物。由于miRNA种类众多，公开发表的通用茎环结构逆转录引物并不是对任何miRNA的逆转录都能成功，这与miRNA本身的长度和碱基序列特点有关。

在乳腺癌患者的乳腺癌组织标本中hsa-miR-141-3p表达含量降低，体外细胞实验研究表明hsa-miR-141-3p参与抑制乳腺癌细胞的增殖、转移和侵袭能力，可作为预示乳腺癌的抑瘤性miRNA(Li P,2017,Cancer Medicine,6,662-672)。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

(一)要解决的技术问题

为了解决现有技术的上述问题，本发明提供一种用于乳腺癌的早期筛查、诊断、疗效监测和/或预后评价的RNA hsa-miR-141-3p检测引物组合，可使逆转录后的hsa-miR-141-3p序列延长，PCR扩增为特异性扩增。本发明还提供一种用于乳腺癌的早期筛查、诊断、疗效监测和/或预后评价的RNA hsa-miR-141-3p检测试剂盒，检测结果准确可靠，操作简便，适于推广应用。

(二)技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：

一种用于乳腺癌的早期筛查、诊断、疗效监测和/或预后评价的RNA hsa-miR-141-3p检测引物组合，包括逆转录引物和PCR引物，逆转录引物的碱基序列如SEQ ID No.2所示。

优选地，PCR引物包括PCR上游引物和PCR下游引物，上游引物的碱基序列如SEQ IDNo.3所示；下游引物的碱基序列如SEQ ID No.4所示。

一种试剂盒，其包含如上所述的引物组。

如上所述的引物组合或试剂盒在乳腺癌的早期筛查、诊断、疗效监测和/或预后评价中的应用。

进一步地，应用的方法包括以下步骤：

S1、提取待测样品的总DNA。

S2、采用如上所述的引物组合对总DNA进行PCR扩增。

S3、对步骤S2获得的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。