[发明专利]一种基于盐酸刺激的哈维弧菌同源重组基因敲除的方法在审
| 申请号： | 201910848668.4 | 申请日： | 2019-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN110591993A | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 邓益琴;冯娟;郭志勋;程长洪;马红玲 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院南海水产研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/90;C12R1/63 |
| 代理公司： | 44001 广州科粤专利商标代理有限公司 | 代理人： | 刘明星;朱聪聪 |
| 地址： | 510000 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 维弧 接合 盐酸 同源重组基因 敲除 刺激 受体菌 基因工程改造 基因敲除 技术基础 同源重组 致病机制 转化效率 传统的 供体菌 转移法 应用 成功 研究 | ||
1.一种提高哈维弧菌遗传转化的方法，其特征在于，其是将哈维弧菌经过盐酸刺激处理后再用于遗传转化的受体菌。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的经过盐酸刺激处理是在含有哈维弧菌的培养液中加入盐酸进行刺激。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述在含有哈维弧菌的培养液中加入盐酸进行刺激，盐酸的终浓度为0.012M～0.024M，处理5～30min。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的盐酸终浓度为0.024M，处理5min。
5.一种基于盐酸刺激的哈维弧菌同源重组基因敲除的方法，其特征在于，将哈维弧菌作为受体菌，与供体菌进行接合转移，经同源重组实行哈维弧菌的基因敲除，所述的哈维弧菌是经过盐酸刺激处理的哈维弧菌。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，是将培养至对数早期的哈维弧菌受体菌经盐酸刺激处理后，用新鲜培养基洗涤后与培养至对数生长期早期的供体菌进行混匀，离心去上清，菌沉淀后重悬，点种至固体平板上，接合过夜，对哈维弧菌进行基因敲除。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述的经过盐酸刺激处理是在含有哈维弧菌的培养液中加入盐酸进行刺激。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述在含有哈维弧菌的培养液中加入盐酸进行刺激，盐酸的终浓度为0.012M～0.024M，处理5～30min。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的盐酸终浓度为0.024M，处理5min。
10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的结合转移是在28℃接合过夜，所述的供体菌为携带有待缺失片段上下游同源臂的重组自杀质粒的供体菌。
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