[发明专利]一种去除核糖体RNA的反转录引物池、试剂盒及去除核糖体RNA的方法在审
| 申请号： | 201910856986.5 | 申请日： | 2019-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN111534513A | 公开（公告）日： | 2020-08-14 |
| 发明（设计）人： | 曹亮;吴胜标;喻志红;蒋华;束文圣 | 申请（专利权）人： | 广东美格基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C40B50/06 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市龙岗区吉华街道甘李*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 去除 核糖体 rna 转录 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种构建转录组测序文库前，用于去除核糖体RNA的反转录引物池，其特征在于，该反转录引物池的序列如SEQ ID NO：1～8所示。
2.一种构建转录组测序文库的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的去除核糖体RNA的反转录引物池。
3.根据权利要求2所述的构建转录组测序文库的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还含有RNase H、DNaseI。
4.根据权利要求3所述的构建转录组测序文库的试剂盒，其特征在于，所述反转录引物池中每条引物的浓度范围为5μM～100μM。
5.一种构建转录组测序文库时，用于去除核糖体RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)针对目的rRNA设计得到反转录的引物池；
(2)提取样品的总RNA，加入引物池进行反转录，得cDNA-rRNA杂合链；
(3)加入RNase H消除cDNA-rRNA杂合链的rRNA，再加入DNase I消除cDNA-rRNA杂合链的cDNA；
(4)回收剩余的RNA产物。
6.根据权利要求5所述的构建转录组测序文库时，用于去除核糖体RNA的方法，其特征在于，步骤(1)是在rRNA对应的基因组上以产物大小为500bp/条～5000bp/条的设计密度设计得到反转录的引物池。
7.根据权利要求5所述的构建转录组测序文库时，用于去除核糖体RNA的方法，其特征在于，步骤(3)中RNase H的用量为3U～6U，DNase I的用量为2.5U～10U。
8.根据权利要求5所述的构建转录组测序文库时，用于去除核糖体RNA的方法，其特征在于，步骤(2)样品总RNA的起始量为1ng～5μg。
9.根据权利要求5所述的构建转录组测序文库时，用于去除核糖体RNA的方法，其特征在于，步骤(2)样品总RNA的完整度RIN值为2～10。
10.权利要求5至9任一项所述方法在构建转录组测序文库中的应用。
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