[发明专利]一种新型生物絮团及应用和利用其标粗凡纳滨对虾的方法

权利要求书

1.一种新型生物絮团，其特征在于：所述生物絮团包括微藻团聚体和共栖异养菌，所述共栖异养菌为假单胞菌属细菌(Pesudomonas sp.)和芽孢杆菌属细菌(Bacillus sp.)；

所述微藻团聚体的制备步骤如下：

⑴絮团微藻的筛选

筛选出绿藻门的普通小球藻(Chlorella vulgaris)/亚心形扁藻(Platymonassubcordiformis)、雨生红球藻(Haematococcuspluvialis)和硅藻门的威氏海链藻(Thalassiosira weissflogii)作为絮团微藻；

普通小球藻或亚心形扁藻的培养：采用f/2培养基，盐度25，培养温度23±1℃，光暗比12hL：12hD，光照强度为60μmol/m²·s，培养期间每天摇晃培养瓶六次；

雨生红球藻的培养：采用BBM培养基，培养温度22±1℃，光暗比12hL：12hD，光照强度为60μmol/m²·s，将雨生红球藻培养至对数生长期末得到种子液；用NaNO₃浓度为0.03mol/L、NaCl浓度为0.3mol/L的低氮高盐BBM培养基将种子液稀释至5×10⁵cells/mL，培养温度设定为22±1℃，光暗比为12hL：12hD，光照强度为200μmol/m²·s，当培养液在490nm波长下的吸光度OD₄₉₀不发生显著改变时收集微藻细胞；

威氏海链藻的培养：采用f/2培养基，盐度30，培养温度22±1℃，光暗比12hL﹕12hD，光照强度60μmol/m²·s，培养期间每天摇晃培养瓶六次；

⑵微藻团聚体的制备与成型粒径的控制

①将步骤⑴的普通小球藻或亚心形扁藻、雨生红球藻和硅藻门的威氏海链藻混合后在2000r/min条件下离心15min后，弃去上清，收集得到浓缩藻液，浓缩藻液与质量浓度2％的谷氨酰胺转氨酶液按1:3的体积比混合，并漩涡震荡1小时，得混合物，备好待用；

②用水配制质量浓度为0.1％-1％的褐藻胶，备用；

③用水配制质量浓度为5％的氯化钙溶液，备用；

④将步骤⑵①中混合物与步骤⑵②中褐藻胶按体积比1:1混合在一起，得混合物；

⑤将步骤⑵④中混合物用滴管向步骤⑵③中氯化钙溶液中逐滴滴加，即可得到微球状的微藻团聚体。

2.根据权利要求1所述的新型生物絮团，其特征在于：所述共栖异养菌的制备步骤如下：

共栖异养菌的培养：严格按照无菌操作要求，用接种环从固体2216E培养基上刮取假单胞菌属细菌、芽孢杆菌属细菌的菌苔，分别接入液态2216E培养基中，30℃，160r/min的条件下培养36h制备种子液，分别得假单胞菌属细菌种子液、芽孢杆菌属细菌种子液。

3.根据权利要求2所述的新型生物絮团，其特征在于：当假单胞菌属细菌、芽孢杆菌属细菌与普通小球藻共培养时，当细菌密度≤5×10⁶CFU/mL时，能够显著促进小球藻叶绿素a合成，并能减轻微藻细胞膜质过氧化损伤；当假单胞菌属细菌、芽孢杆菌属细菌与雨生红球藻共培养时，当细菌密度≤1×10⁷CFU/mL时，微藻生长不会受到影响；当假单胞菌属细菌、芽孢杆菌属细菌与威氏海链藻共培养时，当细菌密度≤6×10⁶CFU/mL时，微藻生长受到明显促进。

4.根据权利要求1所述的新型生物絮团，其特征在于：所述假单胞菌属细菌为W-TJ01，所述芽孢杆菌属细菌为Z-QS01，假单胞菌W-TJ01在生长过程中能够产生鼠李糖，促进微藻和细菌絮凝。

5.根据权利要求1所述的新型生物絮团，其特征在于：所述步骤⑵中微藻团聚体与质量浓度1％-9％的柠檬酸钠溶液混合，得到平均粒径0.30-0.94mm的微球，整个过程在室温下进行，制备出的微球内含有质量浓度63％-87％的活藻细胞。

6.根据权利要求1所述的新型生物絮团，其特征在于：所述微球的具体制备如下：