[发明专利]一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法

权利要求书

1.一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的带节茎段外植体经愈伤组织诱导、基茎丛生芽发生和增殖、克服玻璃化现象、不定根诱导、驯化移栽。

2.根据权利要求1所述的贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无畸形的健壮植株，取其茎尖下茎段；

(2)将1步骤的带节茎段进行消毒处理；

(3)腋芽萌发、愈伤组织诱导、基茎丛生芽发生和增殖同步培养：将经过2步骤消毒灭菌好的带节茎段为材料，接入下列培养基A中，所述A培养基，包括以下原料：

MS培养液

玉米素ZT

6-苄胺基嘌呤6-BA

萘乙酸NAA

蔗糖

琼脂粉

控制光照度、温度、光照时间的条件下进行愈伤组织和腋芽萌发诱导；

(4)优化培养：在3步骤培养基A中继代增殖3代时，将步骤3中培养的增殖苗转入下列培养基B中，所述B培养基，包括以下原料：

B₅培养液

玉米素ZT

6-苄胺基嘌呤6-BA

萘乙酸NAA

蔗糖

琼脂粉

控制光照度、温度、光照时间的条件下进行增殖培养；

(5)将增殖芽丛按生长周期轮流接入3和4步骤培养基中，在保持增殖系数的同时又有效抑制了玻璃化苗的发生，此后，培养基A和培养基B轮流使用；

(6)取5步骤丛芽中的健壮主苗接种于下列培养基C中，所述C培养基，包括以下原料：

1/2MS培养液

萘乙酸

蔗糖

琼脂粉

控制光照度、温度、光照时间的条件下获得苗壮根粗的生根苗；

(7)炼苗和移栽。

3.根据权利要求1所述贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，步骤1中所述带节茎段进行消毒处理的方法为：先用自来水清洗表面的泥土和灰尘，再放到流水下冲洗2h后，置于超净工作台上用体积比为75％的酒精消毒60s，再用质量百分比为0.1％的HgCl₂灭菌8min，最后用无菌水冲洗6次后放在无菌滤纸上吸干表面水分，最终得到消毒灭菌处理的外植体。

4.根据权利要求1所述贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，步骤3中所述A培养基，包括以下原料：

5.根据权利要求4所述贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，所述A培养基的pH值为5.4-5.8。

6.根据权利要求1所述贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，步骤4中所述B培养基，包括以下原料：

7.根据权利要求6所述贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，所述B培养基的pH值为5.4-5.8。

8.根据权利要求1所述贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，步骤6中所述C培养基，包括以下原料：

1/2MS培养液

萘乙酸 0.5-1.0mg/L

蔗糖 30000mg/L

琼脂粉 4800mg/L。

9.根据权利要求8所述贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，所述C培养基的pH值为5.4-5.8。

10.根据权利要求1所述贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，步骤7中炼苗和移栽的方法如下：取6步骤的生根苗，连培养瓶一起置于室温下炼苗，打开瓶盖，从培养基中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入多菌灵溶液中消毒后，移栽至消毒后的腐殖质中保温保湿培养，即得移栽苗。