[发明专利]一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法

说明书

本发明公开了一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的带节茎段外植体经愈伤组织诱导、基茎丛生芽发生和增殖、克服玻璃化现象、不定根诱导、驯化移栽。本发明方法解决了传统獐牙菜属植物有性繁殖过程中变异过大，而无性繁殖极易出现的玻璃化现象等问题，且成本低、时间短、繁殖系数可观、质量和成活率高。

技术领域

本发明涉及中草药繁殖技术，尤其涉及一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法。

背景技术

贵州獐牙菜Swertia kouitchensis Franch.为龙胆科(Gentianaceae)獐牙菜属(Swertia)1-2年生草本。贵州獐牙菜在我国中西部地区被广泛用作民间治疗肝炎的草药，具有清热解毒、利胆退黄、小儿高热、口干渐热、喉咙肿痛、蛇咬伤，主要用于黄疸性肝炎、痈疽疔疮，同时对胆囊炎也有较显著疗效。现代研究表明，贵州獐牙菜中含有体外抗乙型病毒性肝炎的成分，而乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒(HBV)感染的危害人类健康的严重疾病，感染人口众多并能引发多种严重的并发症。全球约有3.5亿HBV感染者，每年因HBV感染引起的死亡人数超过60万。我国是乙型肝炎的高发区，HBV感染患者超过1.2亿。目前临床上使用的抗HBV药物主要为乙肝疫苗、干扰素和核苷类似物，但这些药物远不能满足临床上的需要。通过传统中草药来寻找高效低毒抗HBV药物是一个重要的研究课题，贵州獐牙菜展示了其广阔的开发利用前景。

由于贵州獐牙菜主产区的生态环境日趋恶化，加之人为地过度采挖，野生种群及个体数量急剧锐减，其资源已远远不能满足国内外市场需求。贵州獐牙菜通常以其种子为繁殖单位。但种子萌发率低，种子苗生长缓慢且生物量较小、后代变异大，并受到萌发季节的限制，难以进行规模化、标准化(基因型背景一致)种植和高药效品种的大面积推广。因此，需要寻求一种新的成本低、时间短、质量和成活率高，且能将优良性状固定下来的高效人工繁殖方法来扩大贵州獐牙菜种苗的繁殖量，进行其高品质种苗的工厂化生产，以满足种植需求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，以解决贵州獐牙菜通常以其种子为繁殖单位，存在种子萌发率低，种子苗生长缓慢且生物量较小、后代变异大，并受到萌发季节的限制，难以进行规模化、标准化(基因型背景一致)种植，高药效品种难以大面积推广的问题。

为了解决以上技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的带节茎段外植体经愈伤组织诱导、基茎丛生芽发生和增殖、克服玻璃化现象、不定根诱导、驯化移栽。

进一步地，所述的贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，包括以下步骤：

(1)外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无畸形的健壮植株，取其茎尖下茎段；

(2)将1步骤的带节茎段进行消毒处理；

(3)腋芽萌发、愈伤组织诱导、基茎丛生芽发生和增殖同步培养：将经过2步骤消毒灭菌好的带节茎段为材料，接入下列培养基A中，所述A培养基，包括以下原料：

MS培养液

玉米素ZT

6-苄胺基嘌呤6-BA

萘乙酸NAA

蔗糖

琼脂粉

控制光照度、温度、光照时间的条件下进行愈伤组织和腋芽萌发诱导；

(4)优化培养：在3步骤培养基A中继代增殖3代时，将步骤3中培养的增殖苗转入下列培养基B中，所述B培养基，包括以下原料：

B₅培养液

玉米素ZT