[发明专利]一种维生素A代谢相关基因突变位点的检测方法

说明书

本发明公开了一种维生素A代谢相关基因突变位点的检测方法，涉及生物医学技术领域，通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段，目标片段经过限制性内切酶消化，然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸，得到待检基因位点，最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列；其中，所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸。本发明所述的检测基因突变的方法与传统的SNP位点检测技术相比，可以在一个反应中实现多个SNP位点的检测，具有较高的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，特别是涉及一种维生素A代谢相关基因突变位点的检测方法。

背景技术

维生素A(vitaminA)又称视黄醇(其醛衍生物视黄醛)或抗干眼病因子，是一个具有脂环的不饱和一元醇，包括动物性食物来源的维生素A1、A2两种，是一类具有视黄醇生物活性的物质。维生素A维持正常视觉功能，维护上皮组织细胞的健康和促进免疫球蛋白的合成，维持骨骼正常生长发育，抑制肿瘤生长等，但是过量摄入维生素A可引起头痛、皮肤干燥、脱屑和脱发等症状。

BCM01是类胡萝卜素转化成视黄醇过程中的一个关键酶，BCM01基因的多态性影响维生素A的转化效率，从而影响该营养素正常需求。

BCM01基因多态性的筛查能帮助个体充分了解自己的遗传状况，提前采取相应的健康管理措施。

BCM01基因多态性的筛查一般采用传统的SNP位点检测技术，该技术一次只能对一个基因进行检测，对于需要检测多种基因来说，该方式存在工作量大且效率低的问题。

发明内容

为了传统的SNP位点检测技术存在的一次只能对一个基因进行检测，对于需要检测多种基因来说，该方式存在工作量大且效率低的问题；本发明提供了一种维生素A代谢相关基因突变位点的检测方法。

本发明所采用的技术方案为：一种维生素A代谢相关基因突变位点的检测方法，通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段，目标片段经过限制性内切酶消化，然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸，得到待检基因位点，最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列；

其中，所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸。

在其中一个实施例中，所述目标位点特异性引物包括：

用于扩增维生素A代谢相关基因BCM01-RS6420424片段的第一特异性引物，第一特异性引物的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID Nos：1所示，第一特异性引物的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID Nos：2所示；

用于扩增维生素A代谢相关基因BCM01-RS11645428片段的第二特异性引物，第二特异性引物的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID Nos：3所示，第二特异性引物的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID Nos：4所示；

用于扩增维生素A代谢相关基因BCM01-RS6564851片段的第三特异性引物，第三特异性引物的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID Nos：5所示，第三特异性引物的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID Nos：6所示。

在其中一个实施例中，所述单碱基延伸技术所用的引物包括：

用于扩增维生素A代谢相关基因BCM01-RS6420424片段的第一单碱基延伸引物，第一单碱基延伸引物的核苷酸序列如SEQ ID Nos：7所示；

用于扩增维生素A代谢相关基因BCM01-RS11645428片段的第二单碱基延伸引物，第二单碱基延伸引物的核苷酸序列如SEQ ID Nos：8所示；