[发明专利]检测HPV的组合物、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及分子学生物检测领域，更具体的，涉及HPV检测领域。本发明提供了一种组合物，其可将HPV16/18分型，并还可以特异性地检测HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66和68型，与此同时，本发明还提供了所述组合物用于检测HPV的用途、包含所述组合物的试剂盒以及用于检测HPV的方法。

技术领域

本发明属于分子学生物检测领域，更具体的，属于HPV检测领域。

背景技术

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)是一类分子量较小的无包膜的双链环状DNA病毒，基因组长约8000碱基对(bp)，分为3个功能区，即早期转录区(E区)、晚期转录区(L区)和非转录区(长控制区，LCR)，专性侵染和寄生人体生殖器官及其它组织器官的上皮细胞。而HPV感染以后不仅可能会出现生殖器疣或皮肤疣，更有可能诱发女性宫颈癌，据相关报道，90％以上的宫颈癌都是由HPV感染引起的。

在临床上，根据人乳头瘤病毒不同亚型致病力大小或致癌危险性大小不同可将人乳头瘤病毒分为高危型和低危型两大类。低危型HPV一般与尖锐湿疣或低度鳞状上皮内病变相关，极少引起浸润癌，高危型HPV感染引起外生殖器癌、宫颈癌及高度子宫颈上皮内瘤变。关于高危型与低危型的划分，国际上许多机构都给出了参考建议，依据WHO国际癌症研究机构(IARC)及其他国际组织的研究成果，建议将HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等13种基因型列为高危型别，26、53、66、73、82等5种基因型列为中等风险型别。

据此，本领域中存在着对HPV进行全面的检测的需求。例如，中国专利申请201110156111.8公开了一种人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒，其能够对18种HPV基因型进行检测，检测型别比较全面，且灵敏度也比较高，为1×10³拷贝/ml；但其无法实现16和18具体分型，因为在该试剂盒中，18型和45型必须共用一组探针，从而无法区分18和45型，导致不能对16和18分型。

实际上，HPV16和HPV18的具体分型，在宫颈癌的筛查具有重要的分流作用。如Saslow D等指出：目前ACOG和ACS/ASCCP/ASCP均建议将HPV 16、18分型检测作为分流HPV检测阳性而细胞学阴性患者的标准，即HPV 16、18分型检测阳性者建议行阴道镜检查，或在12月内复查HPV和细胞学。

因此，在本领域中存在着在检测HPV的同时将HPV 16、18具体分型的需求。对此，硕世生物科技有限公司提供了一种HPV检测试剂盒，名为硕世高危型人乳头瘤病毒(HPV16+2)核酸检测试剂盒，该试剂盒可以检测18种型别，包括16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、82；可具体对16和18分型，但这一检测试剂在灵敏度方面有所牺牲，其灵敏度为5×10⁵拷贝/ml。

因此，在本领域中存在着既能对HPV 16和18具体分型又能达到较高灵敏度的HPV检测试剂。

发明内容

为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种能够对HPV16/18分型的引物和探针的组合物，其还能够用于检测HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66和68型，所述组合物包括：

如SEQ ID NO:1所示的HPV 16型上游引物、如SEQ ID NO:2所示的HPV 16型下游引物和如SEQ ID NO:3所示的HPV 16型探针；

如SEQ ID NO:4所示的HPV 18型上游引物、如SEQ ID NO:5所示的HPV 18型下游引物和如SEQ ID NO:6所示的HPV 18型探针；

如SEQ ID NO:7所示的HPV 31型上游引物、如SEQ ID NO:8所示的HPV 31型下游引物和如SEQ ID NO:9所示的HPV 31型探针；