[发明专利]从临床血液中检测单核细胞增生李斯特菌病原菌的方法

说明书

本发明提供了一种从临床血液中检测单核细胞增生李斯特菌病原菌的方法，包括以下步骤：S1、血液中单核细胞增生李斯特菌基因组DNA的提取；S2、PCR检测：S2.1、利用单核细胞增生李斯特菌基因组DNA序列设计特异性的PCR引物，PCR引物包括如SEQ ID NO.1所示的正向引物和SEQ ID NO.2所示的反向引物；S2.2、以提取的单核细胞增生李斯特菌基因组DNA为模板，采用PCR引物进行PCR扩增；S2.3、对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳及检测，扩增出长度为106bp的片段则判定为检测出单核细胞增生李斯特菌病原菌。本发明对血液中单核细胞增生李斯特菌感染的检测极限达到10CFU/mL。本发明实现了对临床血液中单核细胞增生李斯特菌感染的快速灵敏诊断。

技术领域

本发明涉及血液感染病原菌的检测技术领域，具体涉及一种从临床血液中检测单核细胞增生李斯特菌病原菌的方法。

背景技术

血流感染已成为严重的感染性疾病发生方式，血流感染导致的菌血症和败血症等疾病死亡率高。单核细胞增生李斯特菌属于革兰氏阳性菌，单核细胞增生李斯特菌感染引起的李斯特菌脑膜炎病死率高，而且常伴有急性脑梗死等并发症。

临床上单核细胞增生李斯特菌感染的早期诊断和干预以及抗感染治疗具有重要意义。临床传统培养检测方法的“金标准”，不但需要长时间的菌种培养等增菌过程，而且还需要后续繁琐的生理生化或药敏分析等。传统的培养检测方法不仅工作量大、费时费力，同时检测的特异性和灵敏性问题亟需解决。

所以，建立一种简单快速高效的检测血样中单核细胞增生李斯特菌的方法，对于单核细胞增生李斯特菌感染病人的及时诊断、有效治疗和早期干预具有重要的临床指导意义，在临床应用上具有很广阔的应用前景。

发明内容

本发明解决了医院传统培养方法检测临床血液中单核细胞增生李斯特菌感染的检测周期长、特异性低和灵敏度低等技术问题，同时提高了临床单核细胞增生李斯特菌感染检测的检测效率，本发明研发了一种简单、快速、高效的从临床血液中检测单核细胞增生李斯特菌病原菌的方法。本发明首先利用特定的血液中单核细胞增生李斯特菌基因组DNA提取试剂，快速有效地提取出血样中单核细胞增生李斯特菌的基因组DNA；再针对待测单核细胞增生李斯特菌的特异基因设计特异性PCR扩增引物，通过PCR扩增反应实现对临床血液中单核细胞增生李斯特菌感染的快速诊断。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

一种从临床血液中检测单核细胞增生李斯特菌病原菌的方法，包括以下步骤：

S1、血液中单核细胞增生李斯特菌基因组DNA的提取；

S2、血液中单核细胞增生李斯特菌PCR检测：

S2.1、利用单核细胞增生李斯特菌基因组DNA序列设计一段特异性的PCR引物，该特异性的PCR引物包括如SEQ ID NO.1所示的正向引物和SEQ ID NO.2所示的反向引物；其中，

SEQ ID NO.1：5’-GGGAAATCTGTCTCAGGTGATGT-3’；

SEQ ID NO.2：5’-CGATGATTTGAACTTCATCTTTTGC-3’；

引物所扩增的目的片段长度为106bp；

S2.2、以步骤S1中从血液中提取的单核细胞增生李斯特菌基因组DNA为模板，采用步骤S2.1中的特异性的PCR引物进行PCR扩增；

S2.3、对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳及检测，扩增出长度为106bp的片段则判定为检测出单核细胞增生李斯特菌病原菌。