[发明专利]一种同时测定土壤草甘膦及氨甲基膦酸残余含量的方法

说明书

本发明公开了一种同时测定土壤草甘膦及氨甲基膦酸残余含量的方法，该方法是在待测土壤样品中加入碱性水溶液提取，提取后在粗提液中加入有机溶剂进行净化处理，而后加入衍生化试剂进行衍生化反应得到待测液，最后采用梯度淋洗‑高效液相色谱‑荧光检测器法测定草甘膦及氨甲基膦酸衍生物的浓度。本发明操作简便、快速准确，相对平均偏差小，测定精密度及检出浓度能够满足土壤环境监测和农业生态保护的要求。

技术领域

本发明属于土壤环境监测方法技术领域，具体涉及一种同时检测土壤中草甘膦及其代谢产物氨甲基膦酸的残余含量的测定方法，特别是涉及一种通过高效液相色谱仪对土壤痕量级草甘膦及氨甲基膦酸残余含量进行检测的方法。

背景技术

草甘膦(Glyphosate，GLY)是目前世界上使用量最大的有机磷除草剂，广泛用于控制农田或非耕作土地（铁路线、林地、公园及果园等）中一年生或多年生杂草的生长。草甘膦在很长一段时间内被认为是一种较为安全、毒性较低的除草剂。然而随着草甘膦毒理学及生态效应研究的深入，草甘膦对生物的遗传、发育和生殖都有一定的毒副作用或致畸作用；土壤对草甘膦具有很强的吸附能力，草甘膦及其代谢产物氨甲基膦酸（Aminomethylphosphonic acid, AMPA）在土壤环境中代谢相对缓慢，多年轮作施用草甘膦导致其在土壤中逐渐积累并产生一定的环境生态效应。

草甘膦是一种难挥发的水溶性化合物，在土壤中极易被土壤矿物颗粒、有机质等吸附，直接采用纯水提取土壤草甘膦效果欠佳，回收率普遍偏低；草甘膦极性强、缺少发色基团和荧光基团等理化特性，现有分析方法多采用柱前衍生气相色谱+质谱联合分析，程序复杂，操作要求高；柱前衍生+高效液相色谱法是痕量草甘膦检测的另一推荐方法，如2018年7月发布的《水质 草甘膦的测定 高效液相色谱法（征求意见稿）》，但该方法所采用的梯度洗脱程序存在过量衍生化试剂部分残留在C18柱的可能。

我国虽然在食品行业农药残余检测方面已构建草甘膦残余标准分析方法，但目前还未构建同时测定土壤草甘膦及氨甲基膦酸残余的标准分析方法。土壤样品基质复杂，研究和开发一种快速、简便的土壤草甘膦及氨甲基磷酸残余检测方法，促进土壤安全管理具有较强的现实意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简便、快速准确的同时测定土壤草甘膦及氨甲基膦酸残余含量的方法。

本发明提供的一种同时测定土壤草甘膦及氨甲基膦酸残余含量的方法，该方法是在待测土壤样品中加入碱性水溶液提取，提取后在粗提液中加入有机溶剂进行净化处理，而后加入衍生化试剂进行衍生化反应得到待测液，最后采用梯度淋洗-高效液相色谱-荧光检测器法测定草甘膦及氨甲基膦酸衍生物的浓度。上述中，所述碱性水溶液为0.03mol/L的磷酸钠水溶液。

上述中，所述提取的方法为：往土壤样品中加入磷酸钠水溶液，经涡旋混合、超声提取及离心后，获得粗提液，将离心后得到的泥样再按所述提取方法进行二次提取，合并两次粗提液；其中，土壤样品与磷酸钠水溶液的配比为1.00g ：5.00mL，室温下超声提取30min，5000 r/min 离心10min。

上述中，所述净化处理是将粗提液用1 mol/L盐酸调节其pH 至9.0后，再用有机溶剂液液萃取，所述有机溶剂为正己烷。上述中，所述衍生化反应是以0.05mol/L 四硼酸钠溶液为缓冲溶液，1g/L氯甲酸-9-芴甲酯(FMOC-Cl)的甲醇溶液为衍生化试剂，在室温避光条件下衍生化反应4h，过0.45μm 水系滤膜得到待测液。

上述中，采用梯度淋洗-高效液相色谱-荧光检测器法测定草甘膦及氨甲基膦酸衍生物的浓度的方法：

（1）1000 mg/L 草甘膦标准储备液配制：准确称取0.0500g 草甘膦标准品，用超纯水溶解后转移到50mL 棕色容量瓶并定容，获得1000mg/L的草甘膦储备液，于4℃条件下保存；