[发明专利]一种检测前列腺特异性抗原的光谱分析中荧光传感器的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种检测前列腺特异性抗原的光谱分析中荧光传感器的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：

(1)ZGO:Mo/PSA-A溶液的制备：

①将Zn(NO₃)₂、Na₂MoO₄固体加入到300-400μL浓HNO₃溶液中混合搅拌均匀，并加入水混合均匀后得到无色透明的溶液1；

②称取GeO₂和NaOH搅拌溶解于水中，并搅拌7-8h，即得Na₂GeO₃溶液；

③将步骤②中所得Na₂GeO₃溶液逐滴加入到步骤①中所得溶液1中，混合均匀，并使用氨水调节溶液的pH至7-10，并搅拌1-1.5h，随后转入聚四氟乙烯水热反应釜中，在220-225℃条件下加热4-4.5h，升温速率为2-2.5℃/min；反应结束后固液分离取沉淀物，并重新将沉淀物分散在NaOH水溶液中，室温下搅拌12-13h，之后离心收集固体沉淀物，并将所得固体沉淀物分散在N,N-二甲基甲酰胺中，并逐滴加入3-氨丙基三乙氧基硅烷APTES，并将其置于80-85℃水浴中加热反应24-25h，待反应结束后固液分离得到氨基化ZGO:Mo NRs；

④将前列腺特异性抗原适配体PSA-A加入PBS缓冲液中，搅拌混匀，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺与N-羟基丁二酰亚胺的混合溶液EDC/NHS活化30-60min后，再加入步骤③中所得氨基化的ZGO:Mo NRs，并在室温下振荡反应5-5.5h，固液分离取固相，固相经水洗涤后超声分散在PBS缓冲液中，即得ZGO:Mo/PSA-A溶液，所得溶液浓度为1-1.2mg/mL；

(2)Au@Ag@SiO₂/PSA-C的制备：

将Au@Ag NPs溶液加入到乙醇水溶液中，室温下搅拌均匀，并依次加入氨水和10％正硅酸乙酯溶液，搅拌反应3-3.5h；反应结束后固液分离得到Au@Ag@SiO₂ NPs，并用水至少洗涤三次，随后重新分散在水中，所得溶液粒子浓度为0.1-0.2nM；将Au@Ag@SiO₂ NPs溶液加入Tris-硼酸缓冲液TBE溶液中，混合搅拌均匀，向其中加入前列腺特异性抗原适配体互补链PSA-C溶液混匀，并在室温下孵育12-12.5h，反应结束后，固液分离取固相物质，将固相物质用水洗涤三次以上，最后分散在PBS缓冲溶液中，即得Au@Ag@SiO₂/PSA-C溶液，所得溶液浓度为0.1-0.2nM；

(3)荧光传感器的制备：

将步骤(1)中所得ZGO:Mo/PSA-A溶液加入到PBS缓冲液中，并加入步骤(2)中所得的Au@Ag@SiO₂/PSA-C溶液，在室温下振荡孵育2-2.5h，固液分离取固体物质，并将固体物质重新分散在PBS缓冲液中，得到混合溶液2；将配制好的一系列浓度梯度的前列腺特异性抗原PSA标准溶液，分别加入到上述所得混合溶液2中，在摇床上振荡孵育5-6h；用紫外灯照射，最后使用荧光光谱仪测试每组溶液的发光光谱及发光强度，经过这一系列浓度的荧光光谱测定，得到了以前列腺特异性抗原PSA的浓度对数为横坐标，以检测探针ZGO:Mo/PSA-A的发光恢复强度为纵坐标的标准曲线。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)①中所述浓硝酸的浓度为15.8-16.2mol/L，其中Zn(NO₃)₂、Na₂MoO₄、浓硝酸与水的用量比为：2-2.2mmol:0.005-0.006mmol:300-400μL:11-12mL。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)②中固体GeO₂与NaOH质量比为：1.3-1.6:1.5-1.8。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)③中所述Na₂GeO₃溶液与溶液1的体积比为：1.5-2:11.3-12.4。