[发明专利]一种优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白基因及其在制备病毒样颗粒中的应用有效
| 申请号： | 201910863646.5 | 申请日： | 2019-09-12 |
| 公开（公告）号： | CN111187781B | 公开（公告）日： | 2023-09-15 |
| 发明（设计）人： | 涂亚斌;蔡雪辉;王刚;孙明霞 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心）;哈尔滨维科生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/34 | 分类号： | C12N15/34;C07K14/01;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/12;A61P31/20;G01N33/569;G01N33/68;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 11139 | 代理人： | 马鑫 |
| 地址： | 150009 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 优化 圆环 病毒 型衣壳 蛋白 基因 及其 制备 颗粒 中的 应用 | ||
1.一种优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白全长基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种表达载体，其特征在于，含有权利要求1所述的优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白全长基因。
3.一种宿主细胞，其特征在于，含有权利要求2所述的表达载体。
4.权利要求1所述的优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白全长基因在制备猪圆环病毒3型病毒样颗粒中的应用。
5.一种制备猪圆环病毒3型病毒样颗粒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）合成权利要求1所述的优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白全长基因；
2）将合成的基因连接至pET30a载体，产物转化到E.coli DH5α感受态细胞，挑菌鉴定后抽提质粒，重组质粒命名为pET30a-rCap；
3）将pET30a-rCap质粒转入大肠杆菌表达菌株BL21（DE3），培养后，得到含有pET30a-rCap质粒的大肠杆菌菌液；
4）将菌液接种到含卡那霉素的液体TB培养基中，37℃，220rpm摇床上培养2h；然后加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG，25℃，220rpm进行诱导表达20h，随后离心收集菌液；
5）破碎步骤4）中收集的菌液上清，经两步层析纯化，包括第一步阴离子交换层析和第二步凝胶过滤层析，得到猪圆环病毒3型病毒样颗粒。
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