[发明专利]一种基于双适体RCA技术快速诊断H1N1流感病毒的试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种基于双适体RCA技术快速诊断H1N1流感病毒的试剂盒及检测方法，所述的试剂盒，包括如SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：5所示的序列，其中SEQ ID NO：1,SEQ ID NO：2为H1N1流感病毒的核酸适体序列，SEQ ID NO：3为成环反应序列，SEQ ID NO：4为环互补序列，SEQ ID NO：5为RCA反应体系引物2。本发明成本低、检测快速。

技术领域

本发明涉及一种基于双适体RCA技术快速诊断H1N1流感病毒的试剂盒及检测方法。

背景技术

H1N1是一种甲型流感RNA病毒，是人类最常感染的流感病毒之一。H1N1流感曾于1918年大爆发。2009年，中国31个省份累计报告甲型H1N1流感确诊病例92904例，死亡病例200例。2019年以来，印度已确诊6701例甲型H1N1流感病例，其中至少226人死亡，远超2018年同期798例确诊病例和68人死亡的数据。截至2019年以来，希腊感染H1N1流感病毒而死亡的人数已经上升到了127人。由于H1N1可直接感染人，导致人类患病或死亡，其公共卫生意义日渐显著。加强对H1N1监控和检测的研究，在减少世界经济损失和提高人类卫生健康方面，都具有深远的现实意义。

当前流感病毒检测有两个趋势。一是高精度检测，主要技术有RT-real-time PCR、RT-LAMP和微流控、生物芯片及传感器等。多适合大的研究单位和疾病控制部门使用。另外一个是现场快速检测，主要是操作简单的试剂盒。例如，常规滚环扩增(rolling circleamolification,RCA)。适用于基层诊所、普通易感人群和偏远乡村居民。

但常规RCA，需要多种酶和高温裂解流感病毒，其操作复杂，且RNA极易降解，成本高。

发明内容

本发明设计了基于双适体滚环扩增(double aptamer-rolling circleamolification,DA-RCA)检测流感病毒的新方法和试剂盒。该方法无需裂解禽流感病毒，只需通过适体1捕获流感病毒，适体2结合流感病毒，同时适体2作为RCA的引物1，进行RCA扩增。RCA结果通过羟基萘酚蓝(HNB)指示剂显色。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供了一种快速诊断H1N1流感病毒的试剂盒，包括如SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：5所示的序列，其中SEQ ID NO：1,SEQ ID NO：2分别为H1N1流感病毒的核酸适体序列，SEQ ID NO：3为成环反应序列，SEQ ID NO：4为环互补序列，SEQ ID NO：5为RCA反应体系引物2。

在本发明一较佳实施例中，所述RCA反应体系每50μL中包括：

余量为ddH₂0。

在本发明一较佳实施例中，所述H1N1流感病毒的核酸适体,适体1序列SEQ ID NO：1和适体2序列SEQ ID NO：2分别采用H1N1完整病毒颗粒和B型流感病毒颗粒进行点杂交实验进行验证。

在本发明一较佳实施例中，所述H1N1流感病毒的核酸适体1，采用磁珠-多价适体1。

在本发明一较佳实施例中，所述磁珠-多价适体1捕获H1N1流感病毒的缓冲液组分为0.5M NaCl、20mM Tris-HCL和1mM EDTA，缓冲液pH＝7.5。

在本发明一较佳实施例中，所述磁珠-多价适体1-H1N1流感病毒复合物结合适体2的缓冲液组分为0.5M NaCl、20mM Tris-HCL和1mM EDTA，缓冲液pH＝7.5。