[发明专利]一种多指标联检化学发光免疫试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种多指标联检化学发光免疫试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：

合成搭载有CPPO和荧光分子的羧基聚苯乙烯纳米粒子；

合成搭载有CPPO和荧光分子的羧基聚苯乙烯纳米粒子偶联抗体，以形成发光粒子抗体溶液；

合成磁珠抗体溶液；

配置激发溶液；

所述合成搭载有CPPO和荧光分子的羧基聚苯乙烯纳米粒子的方法包括：

在容器中加入去离子水与聚苯乙烯纳米颗粒，乳化剂充分溶解，以得到溶解混合物；

在所述溶解混合物中加入乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺、CPPO以及荧光分子混匀后，缓慢加在水相上，形成混合液体；

将所述混合液体用均质机乳化处理，并在恒温条件下，搅拌2h～48后逐滴加入乙醇破乳，然后缓慢加热至60度，搅拌2h后使用离心水洗涤2次，定容到固含量1％；

所述形成发光粒子抗体溶液的方法包括：

取吗啉乙磺酸缓冲液，加入载有CPPO和荧光分子的羧基聚苯乙烯纳米粒子，并加入碳二亚胺，在37℃下活化2h；

离心处理后用缓冲液洗涤2次，加入四种病毒以及四种病毒对应的标记抗体，在37℃的温度下包被12h以上；

加入甘氨酸、牛血清白蛋白，在4℃的温度下封闭12h，离心处理后重悬于保存液中，稀释500倍使用；

所述磁珠抗体溶液的制备方法包括：

选取氨基磁珠，用硼酸盐缓冲液洗涤3次，并放入硼酸盐缓冲液中悬置；

加入环氧氯丙烷，在37℃的环境下混匀活化0.5～4h；

再用硼酸盐缓冲液洗涤3次，并放入硼酸盐缓冲液中悬置；

加入抗体，在37℃的环境下混匀包被0.5～20h，完成后磁分离，重悬于保存液中；

所述激发溶液的配置方法包括：

在醋酸盐缓冲液中加入H₂O₂混匀，慢慢加入N,N-二甲基甲酰胺对甲基苯甲酸及水杨酸溶解；

加入月桂酰肌氨酸钠后缓缓加入异丙醇，混匀得到所述激发溶液。

2.根据权利要求1所述的多指标联检化学发光免疫试剂盒的制备方法，其特征在于，所述苯乙烯纳米颗粒的固含量为0.5％～3％。

3.根据权利要求1所述的多指标联检化学发光免疫试剂盒的制备方法，所述乳化剂包括脂肪醇与聚氧乙烯醚MOA-7，其含量为1‰～1％。

4.根据权利要求1所述的多指标联检化学发光免疫试剂盒的制备方法，其特征在于，所述保存液包括防老剂2246、牛血清白蛋白、蔗糖以及吐温80。

5.根据权利要求1所述的多指标联检化学发光免疫试剂盒的制备方法，所述四种病毒包括呼吸道腺病毒、呼吸道合胞病毒、乙型流感病毒，以及甲型流感病毒。