[发明专利]一种多指标联检化学发光免疫试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供了一种多指标联检化学发光免疫试剂盒，包括盒体和设于所述盒体内的磁珠抗体溶液、发光粒子抗体溶液、洗涤液、激发溶液，所述盒体内设有多个反应小孔，所述发光粒子抗体溶液包括多种搭载有CPPO和荧光分子的羧基聚苯乙烯纳米粒子。上述多指标联检化学发光免疫试剂盒，通过设计合成了多种搭载有CPPO和荧光分子的羧基聚苯乙烯纳米粒子，并对其进行抗原抗体偶联，使之作为磁免疫化学发光的信号物质，解决了在单个分析流程中只有一种信号物质发出单一波长的光信号的问题，实现了多指标联合检测。本发明还提供了一种上述多指标联检化学发光免疫试剂盒的制备方法。

技术领域

本发明涉及化学发光免疫技术领域，特别涉及一种多指标联检化学发光免疫试剂盒及其制备方法。

背景技术

化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CLIA),是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。化学发光免疫分析仪包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到稳定的基态时，同时发射出光子(hM),利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体)直接标记在抗原(化学发光免疫分析)或抗体(免疫化学发光分析)上，或酶作用于发光底物。目前的商品化的化学发光系统有四种：HRP——鲁米诺体系、ALP——AMPPD体系、吖啶酯直接标记体系、三联吡啶钌电化学发光体系。

CPPO，双草酸酯，化学名为双(2,4,5–三氯水杨酸正戊酯)草酸酯，分子式是C26H24Cl6O8，分子量为677.182，CAS登记号为30431-54-0，不溶于水,易溶于有机溶剂用作发光材料。化学发光冷光源是种颇具应用前景的新型光源，是人类用化学手段模拟生物系统(如萤火虫)的结果。化学冷光源作为光源有许多独特的优点。化学发光过程无火焰，基本无热辐射，不产生表观电流，不出现碳分效应，可作为无干扰光源。化学发光过程不受地域，环境和气候条件的限制。是一种方便的无污染光源，具有其它光源无法比拟的能量转换效率。

现有的化学发光免疫试剂盒，商品化的化学发光系统的发光物质都只有一种，从发光原理和发光条件上看，四种不同的发光体系无法统一，导致了现有的化学发光系统都无法进行多指标联合检测，检测效率低。

发明内容

本发明的目的是提供一种多指标联检化学发光免疫试剂盒及其制备方法，以解决现有的化学发光免疫试剂盒因无法进行多指标联合检测而导致检测效率低的问题。

本发明提供了一种多指标联检化学发光免疫试剂盒，包括盒体和设于所述盒体内的磁珠抗体溶液、发光粒子抗体溶液、洗涤液、激发溶液，所述盒体内设有多个反应小孔，其中：所述磁珠抗体溶液用于搭载抗体；所述发光粒子抗体溶液用于标记被测抗原；所述洗涤溶液用于清除非被测抗原；所述激发溶液用于使得搭载抗体后的磁珠抗体溶液和标记后的被测抗原发光，所述发光粒子抗体溶液包括多种搭载有CPPO和荧光分子的羧基聚苯乙烯纳米粒子。

上述多指标联检化学发光免疫试剂盒，使用时，将50ul磁珠抗体溶液加入反应小孔中，加入50ul样本，加入50ul发光微球抗体溶液，混匀，在37℃的环境下温育20min，然后进行磁分离，用冲洗液洗涤4次，最后磁分离去掉上清液后，加入100ul激发溶液混匀，稳定30秒后记录相应波长的光强度值，将标准品的浓度与光强度值做图得到标准曲线，未知样品的浓度，经由光强度反向计算得到，通过设计合成了多种搭载有CPPO和荧光分子的羧基聚苯乙烯纳米粒子，并对其进行抗原抗体偶联，使之作为磁免疫化学发光的信号物质，解决了在单个分析流程中只有一种信号物质发出单一波长的光信号的问题，实现了多指标联合检测。

本发明还提供了一种多指标联检化学发光免疫试剂盒的制备方法，包括：合成搭载有CPPO和荧光分子的羧基聚苯乙烯纳米粒子；合成搭载有CPPO和荧光分子的羧基聚苯乙烯纳米粒子偶联抗体，以形成发光粒子抗体溶液；合成磁珠抗体溶液；配置激发溶液。