[发明专利]基于HRP催化聚苯胺原位生成用于AFB1的检测方法

权利要求书

1.基于HRP催化聚苯胺原位生成用于AFB1的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1）DNA正四面体探针金电极的合成；2）将已知不同浓度AFB1-HRP抗原分别与步骤1）得到的DNA正四面体探针金电极孵育；3）然后将步骤2）孵育后的DNA正四面体探针金电极与苯胺聚合缓冲液反应检测聚苯胺的电化学信号获得AFB1-HRP抗原浓度与聚苯胺的电化学信号的标准曲线；4）将未知浓度待测样品、AFB1-HRP与步骤1）得到的DNA正四面体探针金电极孵育，然后与苯胺聚合缓冲液反应检测聚苯胺的电化学信号；5）通过聚苯胺的电化学信号对应于标准曲线得出AFB1的浓度；

所述步骤1）的具体步骤如下：将4种核酸溶液、TCEP和TM buffer，混匀后在水浴加热，冷却得到溶液，然后在金电极表面滴加上述溶液室温下孵育，孵育后将电极浸泡在EDC和NHS混合溶液中室温活化，PBS清洗电极，加入单克隆抗体，继续孵育得到DNA正四面体探针金电极；所述4种核酸溶液分别为Tetra-A-COOH、Tetra-B-SH、Tetra-C-SH、Tetra-D-SH，所述Tetra-A-COOH的核苷酸序列为：

COOH-TTTTTTTTTT-ACATTCCTAAGTCTGAAACATTACAGCTTGCTACACGAGAAGAGCCGCCATAGTA；

所述Tetra-B-SH的核苷酸序列为：

HS-TATCACCAGGCAGTTGACAGTGTAGCAAGCTGTAATAGATGCGAGGGTCCAATAC；

所述Tetra-C-SH的核苷酸序列为：

HS-TCAACTGCCTGGTGATAAAACGACACTACGTGGGAATCTACTATGGCGGCTCTTC；

所述Tetra-D-SH的核苷酸序列为：

HS-TTCAGACTTAGGAATGTGCTTCCCACGTAGTGTCGTTTGTATTGGACCCTCGCAT。

2.根据权利要求1所述的基于HRP催化聚苯胺原位生成用于AFB1的检测方法，其特征在于，所述步骤2）中的AFB1-HRP抗原的浓度为0.1~200 ng mL^-1。

3.根据权利要求1所述的基于HRP催化聚苯胺原位生成用于AFB1的检测方法，其特征在于，所述步骤3）中的苯胺聚合缓冲液为醋酸-醋酸钠溶液、苯胺和过氧化氢配制而成。

4.根据权利要求1所述的基于HRP催化聚苯胺原位生成用于AFB1的检测方法，其特征在于，所述步骤3）中的DNA正四面体探针金电极与苯胺聚合缓冲液的体积比为：1:100-1:1000。

5.根据权利要求1所述的基于HRP催化聚苯胺原位生成用于AFB1的检测方法，其特征在于，所述步骤4）待测样品、AFB1-HRP与步骤1）得到的DNA正四面体探针金电极的体积比为1:10-1:30。

6.根据权利要求1所述的基于HRP催化聚苯胺原位生成用于AFB1的检测方法，其特征在于，所述待测样品为米、小麦、玉米、高粱、大麦、荞麦中的一种或几种。

7.根据权利要求1所述的基于HRP催化聚苯胺原位生成用于AFB1的检测方法，其特征在于，所述DNA正四面体探针金电极的直径为2 mm。